[求助]用做细胞爬片的盖玻片的处理

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]用做细胞爬片的盖玻片的处理

13 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]用做细胞爬片的盖玻片的处理

tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态离线

发表于 2012-9-8 13:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的处理是：
1. 无水乙醇浸泡72小时
2. APES处理：APES与丙酮1：50混合，盖玻片在其中浸泡30秒，稍干燥，在纯丙酮中涮两下，烘干。

我的问题是，盖玻片碰到液体就相互粘在一起，很难分开，而且粘合面不能与液体接触，达不到浸泡目的，所以要一片一片的用镊子夹着做，累的半死。效率实在是低。还有啊，处理过后，片子上老是有白色的斑斑点点的东西，我已经很小心的把他们一片片竖起来凉干了，还是这样，无奈啊。
大家都是怎么处理的啊？有没有便捷有效的方法啊？

vera+[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2012-9-8 13:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先应该用硫酸浸泡过夜，冲洗后再用无水乙醇处理，这样通常就不会有斑点了，

wood533[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2012-9-8 13:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我处理如下：1.75%酒精浸泡过夜。
2双蒸水浸泡、冲洗。
3.三蒸水浸泡冲洗
4.放在铁饭盒高压灭菌。

tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态离线

发表于 2012-9-8 13:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 vera+ 于 2012-9-8 13:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

先应该用硫酸浸泡过夜，冲洗后再用无水乙醇处理，这样通常就不会有斑点了，

硫酸浓度多少啊？

tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态离线

发表于 2012-9-8 13:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 wood533 于 2012-9-8 13:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我处理如下：1.75%酒精浸泡过夜。
2双蒸水浸泡、冲洗。
3.三蒸水浸泡冲洗
4.放在铁饭盒高压灭菌。

你这样处理好象只是脱脂处理，细胞爬得牢吗？在免疫组化过程中不会掉下来吗？尤其是原位杂交要洗N多遍的。

969[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74241
精华 0
积分 429
帖子 518
信誉分 100
可用分 3441
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态离线

发表于 2012-9-8 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室：
1. 超声超洗1小时，自来水洗净，烘干。
2. 重镉酸甲洗液浸泡24小时（可以采用一个带盖广口器皿，用镊子一片片放进去），自来水洗10遍，双蒸水洗3遍，烘干。
3. 收集放置于培养皿中，高压消毒灭菌，烘干，即可使用。

yysr238[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79378
精华 0
积分 400
帖子 480
信誉分 100
可用分 3233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2012-9-8 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还是你们有耐心啊，我只是把盖玻片高压灭菌就用了。

lagua123[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 77374
精华 0
积分 437
帖子 533
信誉分 100
可用分 3511
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态离线

发表于 2012-9-8 13:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的处理：
1.玻片处理：圆形或者方形，24孔板专用的细胞爬片。过碱过酸处理后，浸泡于95％乙醇中备用。使用前用丝绸布擦干净，高温高压消毒。
2.24孔板铺片后，每孔40ul多聚赖氨酸包被4小时，用双蒸水轻洗两次，凉干，备用。
3.将吹打均匀的细胞悬液滴入孔中，每孔0.5ml。细胞密度视自己的需要而定，但不能太稀疏。
4.细胞细胞贴壁充分后，吸去未贴壁的细胞悬液，加入培养液，每孔1ml。（也可24小时后，再换液）
5.另外，需准备好小镊子和注射器针头做的小钩子，取爬片细胞时用。

yes4[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态离线

发表于 2012-9-8 13:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好像高压一下就直接可以用了吧，上次有次甘时间，直接酒精灯上烧了一会就用来养细胞了。

milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态离线

发表于 2012-9-8 13:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

怎么可以买到 24孔板专用的细胞爬片，多谢!

13 1/2 1 2 ››