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标题:[求助]尼氏染色鉴定海马神经元

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1
 

[求助]尼氏染色鉴定海马神经元


我在培养海马神经元,镜下观察:24h贴壁良好,前3-4天细胞也可以,可是在继续培养感觉看到的细胞就越来越少,我用尼氏染色法染了几张片子,可是看不出哪些是神经元,那些不是,尼氏染色是不是只有神经元染色?3-4天以后的细胞,虽然镜下看着很少,但尼氏染色后细胞很多,几乎连成一片,是不是不是神经元了?我用或不用阿糖胞苷处理,似乎也没有很大的区别?
问题:
1、神经元尼氏染色正常情况下应是什么样子?非神经元细胞染色吗?是什么样子?
2、上述几乎连成一片的细胞,是不是不是神经元了?
希望尽快得到有经验同行的指导,以求实验能继续往下进行。多谢了!
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2
 

尼氏染色好像鉴定神经元特异性不强, 我也在鉴定神经元, 最初也想用尼氏染色, 但是文献上基本没有用这种方法, 只是在非常古老的一本组织化学方面的书上(80年代出版)提到过, 认为这是一种经典的鉴定神经元的方式。 现在大部分都用免疫组化的方法鉴定, 如MAP2与GFAP的双染, NSE染色, NF染色。
你有图片吗? 有图片可以让大家帮你看看
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好,谢谢各位战友,我这就贴上几张上来。。。

以下几张分别是在同一条件下培养相同的时间(大约14天左右)—— ,但是染出来的细胞形状、数量差别很大,显微镜下观察第二张细胞数目比较密集,数量较多,不知以下几张图片中哪张更像是神经元细胞,不知为何会出现这种差别,恳请请各位战友指点为盼,多谢!

第一张:
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第二张:


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第三张:


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第四张:


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第四张上深染的又是什么?是死了的神经元细胞吗?我现在正培养的一批细胞前3天很像第一张的样子,以后就越来越像第二张的样子了。而且培养皿中几乎看不到像第二张中成片的细胞,染出片子来才能看到。
盼望得到战友们的指导,谢谢!
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尼氏染色在分色恰当时只有神经元染色,可以看到明显的空泡状核以及明显的 核仁。你的第四张照片深染的细胞才是真正的神经元!给你贴张图看看。图中深染的是神经元。


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22592403.jpg (8.2 KB)
 
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多谢!
再请教一下:神经元未染色前在镜下观察也能很清楚的看到吗?我现在养着的细胞(11天的),镜下看到的很少,而且好多都是圆的没有突起,有的突起很短,生长正常的神经元不应该是这样吧!能否介绍一点这方面的经验?
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kulee[使用道具]
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在倒置相差显微镜下观察,神经元应该看的很清楚,尤其是培养11天的,镜下可见神经元突起长,分支比较多。你所说的没有突起的细胞可能是杂细胞,比如剥膜不干净可导致成纤维细胞污染。
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