细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞直接冻在-80度又放入液氮中会怎样？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 18  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞直接冻在-80度又放入液氮中会怎样？

8s5g[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77636
精华 0
积分 469
帖子 538
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
1

发表于 2012-9-9 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞直接冻在-80度又放入液氮中会怎样？

忘了放在-20度，冻存的细胞有危险吗？
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
2

发表于 2012-9-9 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存时，速度太快，细胞内外的水分会很快形成冰晶，引起一系列不良反应。例如：细胞脱水使局部电解质浓度增高，PH值改变，部分蛋白质由于上述因素而变性，引起细胞内部空间结果的紊乱。

细胞内冰晶的形成和细胞膜系统上蛋白质、酶的变性，引起溶酶体膜的损伤，——后果就不抄了哦！

核内DNA也是冷冻时易受损伤的部分，冰晶体积膨胀造成DNA的空间构形发生不可逆损伤性变化，细胞会死的。

DMSO是保护剂。可以使冰点下降，同时提高胞膜对水的通透性。

缓慢冷冻方法可以使细胞内的水分渗出细胞外，在细胞外形成结晶，对细胞损伤小些。

以上摘自《细胞培养》——司徒镇强。
顶部
8s5g[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77636
精华 0
积分 469
帖子 538
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
3

发表于 2012-9-9 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那冻的细胞还能要了吗？
顶部
bohe221[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74583
精华 0
积分 419
帖子 457
信誉分 100
可用分 3228
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
4

发表于 2012-9-9 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

过一个礼拜复苏一瓶试试，看能不能成功，毕竟付出了劳动，直接扔掉有点可惜，不过要做好坏打算，再冻一批，以防万一。
顶部
qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
5

发表于 2012-9-9 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实所有的方法都是个概论，而且都是很严格的要求，真正的实验中，不一定完全遵循所有要注意的内容，不过，什么该做，什么决对不能做，这个要根据自己的实验来不断摸索。
比如说，细胞培养需要无菌，要求的地方很多很细致，其实在高压前，只要把瓶子弄干净就可以，因为高压已经杀灭了细菌，在高压后才必须非常严格无菌操作，可有些新手就多做了很多无用的繁琐的工作，这也是成长所必要的。
说这些是要说，你不要总是担心，而应该多尝试一下，如果复苏后细胞活性还好，那就可以说对细胞伤害不是很大，如果细胞大部分死亡，那就证明影响很大。
希望你在鉴定以后，能把自己的经验写在丁香园，这样也可以让更多的人受益，同时，我觉得，如果你实验了一遍，也是你的一种财富，久了，你就成为了专家，呵呵，专家都是在不断的错误中，不断的探索形成的，希望你实验顺利！
顶部
wmp1234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79925
精华 0
积分 588
帖子 855
信誉分 100
可用分 5078
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
6

发表于 2012-9-9 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。
一般按照下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。
你忘掉了缓慢冻结的前几步，我想以上情况都有可能发生，最好的验证办法就是复苏后观察，但应注意细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃。
希望能对你有所帮助。
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
7

发表于 2012-9-9 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实,我们冻存细胞就是这样冻存的,效果很好。曾经我们试过室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（-20℃30分钟）→低温冰箱（－70℃ 一下可以保存比较长时间）→液氮，在复苏时，碎片比直接放入－70℃再放到液氮内的细胞复苏是更多。
实践是检验真理的唯一标准喽。呵呵
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
8

发表于 2012-9-9 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室一直就是直接放入-80度冰箱的，效果很好！所以个人认为没有关系！
祝你成功
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
9

发表于 2012-9-9 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要看你的冻存条件，如果是冻存盒冻的，直接放-80度，4h后就可以转液氮，我就是这么做的，解冻后成活率90%以上。但以前我没用冻存盒的时候，遵循的是先4度，再-20度，再-80度，然后液氮的步骤，不同的细胞成活率不一样，但最高的也就40%。我个人认为冻存过程对细胞的复苏有很重大的影响，无论是冻存盒还是不用冻存盒，都是为了使它的温度慢慢下降，快速降温容易使细胞发生echo9450627 和wangll4585 说的那一系列变化，最终导致复苏细胞成活率降低。但你可以解冻一只看看成活率，再决定能不能要。
顶部
8s5g[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77636
精华 0
积分 469
帖子 538
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
10

发表于 2012-9-9 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家帮助!
我下周复苏后会把结果贴在这里的.谢谢!
顶部
 18  1/2 12››