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标题:[求助]胶原酶消化的问题

wsll[使用道具]
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发表于 2012-9-9 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]胶原酶消化的问题

我用的sigma胶原酶五，怎么出现了好几次消化不了的情况？我有加DNA酶一，不知道是不是这两种酶会互相抑制？以前用没有含钙镁的HBSS配的就没有问题，这次是新配的，用了含有钙镁的HBSS，难道是这个原因吗？请教啊……
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发表于 2012-9-9 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

酶的量是底物的5-6倍,胶原酶是需要Ca离子的,适当延长消化时间.
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loli[使用道具]
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发表于 2012-9-9 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想你是用来分离细胞吧，钙镁两种离子对细胞有损伤，HBSS最好还是不要加，胶原酶用于消化细胞间质胶原，DNA酶1防止分离细胞时，细胞黏附聚集，两种酶理论上讲不会存在抑制作用，建议你从别的地方再考虑一下。不知你是分离什么细胞，为什么用胶原酶五？
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发表于 2012-9-9 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想用胶原酶消化睾丸支持细胞，为了细胞不成团聚集，想加入DNase1，但不知道用什么液体配制该酶，如何保存，请赐教。多谢！！
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发表于 2012-9-9 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

说明书上应该会注明，我消化的是胰腺细胞，用HBSS配置的
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-9-9 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直在做睾丸组织的细胞分离培养，有问题联系我，共同研究啊，哈哈
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发表于 2012-9-9 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这次还是消化不了啊！很奇怪……我用自己配的DHanks融的胶原酶，搅拌过夜，然后再四度过夜，用这个方法上次配的胶原酶四可以用的，这次就完全不行了，不知道是为什么！我配的DHanks中没有含钙镁啊。难道是过了两个夜的问题？顺便想问一下，为什么要四度过夜啊？
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发表于 2012-9-9 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用胶原酶分离肝星状细胞,用胶原酶四,用不含钙、镁的HBSS配置的，INVITROGEN公司的，效果还可以，不过钙镁离子不会抑制胶原酶活性，用的时候37度预热，活性最高。
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wsll[使用道具]
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发表于 2012-9-9 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位配的时候具体操作是怎么样的呢？
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-9-9 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请问：DNA酶1如何配制？我也是消化组织原代培养用的。
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