细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]大鼠胸主动脉平滑肌细胞!!

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]大鼠胸主动脉平滑肌细胞!!

taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
1

发表于 2012-9-9 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]大鼠胸主动脉平滑肌细胞!!


我今天做了三只大鼠,可取下的平滑肌细胞少的可怜,我的过程是这样的,请大侠,们指教:
1.三只大鼠体重都在200克一下,雌性.注射过量的戊巴比妥钠将其麻倒,然后脱颈椎处死,酒精泡30分钟
2.开胸取胸主动脉2厘米左右
3.脱去筋膜
4.用镊子将血管翻过来(就象脱套头的毛衣,脱反过来),使内膜在外,外膜在里.然后用镊子刮几下去除内皮细胞
5.关键就是这第五步----撕中膜平滑肌,怎么撕都撕不下来,它和外膜粘得那么紧,用镊子一撕就把血管撤断了
请问各位大侠是怎么取中膜平滑肌的?

另外看了前面的帖子,有用消化的方法.用消化的方法岂不是把成纤维细胞等也消化下来了吗?怎么才能保证平滑肌的纯度呢?

谢谢大家帮忙!
顶部
redbutterfly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76433
精华 0
积分 701
帖子 1102
信誉分 100
可用分 6281
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
2

发表于 2012-9-9 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己没有做过这个试验,但是我见我师姐做过,她做得是豚鼠得,不知道你用得是什么方法,如果是消化法得话,我想你是不是酶消化时间不够啊!,成纤维细胞是可以通过贴璧纯化去掉得,因为它和平滑肌细胞得贴璧时间不一样得,不知道对你是否有帮助,我只知道这么多,你可以看相关书籍得!
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3

发表于 2012-9-9 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2012-9-9 12:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我自己没有做过这个试验,但是我见我师姐做过,她做得是豚鼠得,不知道你用得是什么方法,如果是消化法得话,我想你是不是酶消化时间不够啊!,成纤维细胞是可以通过贴璧纯化去掉得,因为它和平滑肌细胞得贴璧时间不一样得, ...

谢谢,我用的是贴壁法
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
4

发表于 2012-9-9 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过大鼠的平滑肌细胞培养，也是撕中膜，撕的时候要在解剖镜下操作，用一支很尖的镊子和一只普通的眼科镊，不可能将整片的中膜都撕下，所以，要一条一条的撕，将发丝状的小条再用眼科剪剪碎，贴块法培养即可。
希望对你的实验有帮助。
顶部
zzzz[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74598
精华 1
积分 656
帖子 967
信誉分 102
可用分 5638
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
5

发表于 2012-9-9 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你细胞现在爬出来了吗？我养的也是大鼠胸主动脉平滑肌细胞，贴块法，但一直没见细胞爬出来
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
6

发表于 2012-9-9 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

爬了,但不知道是不是平滑肌,因为它不是在组织块旁边爬的,而是在"空地"上爬的,然后爬到组织块旁边
顶部
大白菜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76277
精华 0
积分 230
帖子 220
信誉分 100
可用分 1831
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
7

发表于 2012-9-9 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那就有点够戗了，我养过食管平滑肌细胞，是从组织块向外发散爬出的，但是换上主动脉爬不出来了，我怀疑我撕内膜时对细胞牵拉太狠，所以我现在改剥外膜，还在等待结果之中。
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
8

发表于 2012-9-9 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

外膜不是有弹性吗,怎么撕?只有中膜没弹性才能撕,内膜用镊子刮一下就能去掉了
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
9

发表于 2012-9-9 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我和你养的是一样的细胞，现在终于爬出来了。我用的是组织块贴壁法，HECLONE的胎牛血清，和GIBCO的DMEM培养基。我的经验总结如下，供你参考：
1，组织块尽量剪得碎些，文献报道是1MM，其实0.5MM更好；
2，第一次加胎牛血清可以多加一些，我用的HECLONE的胎牛血清，一开始给的是20%，很长时间都没有细胞爬出来，后来我多加了些约30%-40%，就没等那么长，会有细胞爬出；
3，注意绝对的静置，如果培养基没有变黄，就不要拿出来看，一般刚开始养上，最好等到第5或第6天再看；
4，我个人认为刚开始养最好还是从外面撕掉外膜，再剪开刮掉内皮比较好，因为这样可以较好的避免对中膜的牵拉；从内面撕去中膜如果没有很尖的钟表镊，一则容易夹损细胞，二则容易牵拉导致细胞间的缝隙连接损坏，不利于细胞的爬出。
你现在细胞养得如何，希望这些经验对你能有帮助，期待你的交流。
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
10

发表于 2012-9-9 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我始终不明白怎么从外面撕掉外膜?
因为大鼠的胸主动脉太细,取出后是能撕掉外面的"筋膜"(不是外膜),外膜有弹性怎么撕呢?还望henry_by 指点

所以我觉得我现在养的很大程度上是外膜上的成纤维细胞,因为我上次做没取好.
顶部
 15  1/2 12››