[求助]巨噬细胞分离纯化中的小问题

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标题:[求助]巨噬细胞分离纯化中的小问题

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-9-9 12:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的试验目的是收集大鼠腹腔巨噬细胞进行相关研究。在收集过程中不可避免有血液成分混入，经2小时培养贴壁后，用PBS洗了几遍（包括吹打），还是有很多杂细胞掉不下来，巨噬细胞不能纯化，请问问题出在哪里啊？因为只是分离纯化，所以我用的培养基只是RPMI-1640,没有加血清的。不知道问题是不是出在这里？

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-9-9 12:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果有血液混入，要破红细胞。我以前也分离过巨噬细胞，贴壁两小时候，轻轻晃动培养瓶，将未贴壁的细胞倒掉即可，可以用1640，不加血清，影响不大，因为巨噬细胞不能传代培养的，一般观察48h

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-9-9 12:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我不仅摇了，还吹打了，还是有很多杂细胞啊。镜下观察好像以中性粒细胞居多，而且巨噬细胞数量也不够。能否说得详细点?

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-9-9 12:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也在做巨噬细胞培养，需要反复洗涤，轻柔腹腔，可以提高细胞产率，操作小心些，可以减少血液混入，贴壁后可以较用力晃动，拍打，纯化效果很好

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-9-9 12:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还是不行啊～细胞一次比一次少，还是只有第一次稍微多点。麻烦哪位高手详细指点一下嘛。。。

911[使用道具]
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发表于 2012-9-9 12:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就我自己的体会，要避免血液成分混入，得从处死动物就开始注意，动作要快但切忌粗暴，尤其要注意不能让动物腹部受压，开口时分层剪开，避开血管。吸管也要仔细检查进行选择，选择前端较细壁较厚而光滑的，揉腹腔时一定要轻柔，吸液时尽量避免刮着腹壁。贴壁后晃动但不要太用力，倒掉培养液即可，纯化效果不错。当然了，晃动的时间和力度都要靠自己去把握的，影响细胞贴壁的速度和松紧的因素不少啊。还有啊，我一般用含5%血清的培养液。