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标题:[求助]万分紧急求助－细胞消化

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发表于 2012-9-9 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]万分紧急求助－细胞消化


现在我发现胰酶消化不下细胞，0.25%胰酶，我在培养箱里孵育了5min，竟然还贴壁贴的很好，实在没办法了。请各位高手帮帮忙吧，我怕消化时间长了对细胞有伤害，所以只能放弃消化，就吹打，可是大部分是吹不下来的。 痛苦ing！
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以尝试一下：
1.用冰D-Hank's液洗细胞两次；
2.用刚解冻的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培养瓶，开过口的和时间长的都不用。

我遇到过的情况和你的一样，37度孵育的消化不动细胞，原因我也不清楚。用马上解冻的效果特别好，1-2分钟就可以了。我做的是A549细胞。
如果愿意尝试并效果好的话，请告诉一声。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充一下，可以在胰酶中加点EDTA试试，另外你的胰酶配了多长时间了，时间太长的话消化能力会下降。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用0.25%的胰酶加0.02%的EDTA就可以,效果很好的.消化前用PBS洗2-3次,加入胰酶和EDTA(以刚覆盖瓶底为宜)后轻轻晃动.,镜下观察.不过我觉的胰酶还是先在37度预热一下比较好.仅是个人经验,希望对你有帮助!
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以尝试加一点trypsin,效果会好些!
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位的指点，我是才配了两周的胰酶，不过我发现95D细胞很快我就消化下来了，但是RAW264无法消化下来，一点发应都没有。我不敢加EDTA啊，怕影响细胞。
我试试看吧，“用刚解冻的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培养瓶”。
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有就是，我觉得每种细胞消化都不同，很难把握啊，我上次就把一瓶细胞消化过了。 胰酶要不要调PH值啊？
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我都快要疯了，加了0.02%的EDTA还是不行。
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在37度里放了15min，终于有一部分变圆了，但是没飘起来，还好吹一下可以基本上吹下来。但是我担心这种强行的吹打会使细胞受到太大的损伤。
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了了[使用道具]
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发表于 2012-9-9 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那就加大胰酶的浓度，你上面说的吹一下就基本上吹下来，这不算是强行的吹打吧．你这种细胞也太难搞了，它是哪类的
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