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标题:[求助]细胞 污染!

bling[使用道具]
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[求助]细胞 污染!


星期一养了脊髓和皮层的原代培养,分别在两个培养板里,今天发现皮层那板里有两个孔被污染了,培养液变黄,有几个小黑点,一团白色的东西,镜下看到很长的菌丝,脊髓那一板没污染,请高手指教一下,可能是哪个环节出了问题?不胜感激!
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yhz1973[使用道具]
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要试着自己分析原因
1.培养液应该没有问题,如果有问题的话,应该全部污染
2.你操作时所用器械的问题:如果当时种的时候用的是一个移液管,那便有可能是培养板的两个孔有问题
3.操作:有可能当时操作皮层那两个孔的时候不太规范,污染了
4.观察一下培养箱,如果是刚被污染,也有可能是培养箱的问题
我觉得最有可能的是操作的问题。做原代培养最怕的就是操作不规范
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c86v[使用道具]
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从你的描述应该确定是污染了。避免污染的环节有很多,包括器械的严格无菌消毒,操作前无菌工作台消毒,进入工作台的物品包括手,用75%酒精擦洗,工作时操作接近酒精灯得火焰,都可以有效降低污染得发生。至于具体操作过程中得无菌,我是学外科的,不知楼主是否同意可以借鉴一下外科的无菌术原则,其实说白了就是要在操作的每一部清晰的判断什么是有菌或相对有菌,什么是无菌或相对无菌,原则就是不能让有菌物品接触无菌区域如细胞培养平,另外预防培养液的污染也很关键。我们那大部分人用二抗,我用的是三抗(P.C/S.M/G.M),至今还没有出现污染,如果有兴趣可以把我的三抗配方发给你。能把你认为污染的照片发给我看看吗?也很想看看,学习一下。
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bling[使用道具]
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谢谢两位的分析!
我一看到污染就把培养板扔了,没有拍照。
可不可以把三抗配方发给我看看?谢谢
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wood533[使用道具]
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我也想知道你三抗的配方.我现在在养杂交瘤细胞,我就怕被污染,象你学习养细胞.我的邮箱是wind9732@163.com,先谢谢你了.
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zhenxin[使用道具]
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还是关注一下自己的培养箱一下,培养箱污染的 概率大德多!你的污染如果是在中间孔那么操作的规范性还要注意,如果是在边孔,建议清洗一下培养箱!!
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101010[使用道具]
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其实想防止污染,加抗生素的作用是非常有限的,更多的时候只是一种习惯或心理安慰,我觉着还是要在规范操作及改善培养环境上下功夫。
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bling[使用道具]
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能否在改善培养环境上给我一些具体的建议呢?我们实验室最近污染频繁发生,痛苦啊!
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dog002[使用道具]
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定期清洗培养箱,打扫细胞培养室等等
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ROSE李[使用道具]
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我也想要三抗配方,谢谢,现在每天都为污染吃不香睡不着,太折腾人了。
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