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标题:【求助】细胞总是聚团，为什么？

whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】细胞总是聚团，为什么？


我养的HELA细胞，传代以后，发现细胞有聚团现象，开始以为是吹打不充分，可是几次下来都有。这是为什么呀，有人告诉我是某种东西污染了，可没有发现异常，细胞长的还很快。不解ing！
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化不完全，或消化时间不够，都会出现聚团的现象！

消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过头的时候，圆形的细胞容易聚堆，再要分开确有困难！

影响生长吗？——如果不影响生长就没问题，只是计数的时候要麻烦点了！

再消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前，就用手轻磕培养瓶的侧壁，使细胞从壁上脱落，就可以了！——最好不要吹打，对细胞性状和生长都不好！

还有，只要细胞培养液清亮，一般不是污染。因为真菌污染一般很少见的！
真菌在显微镜下可以看到菌丝的！
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daod[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有些细胞就是有相互聚集的特性，这个很难解释，即使吹打均匀，细胞在贴壁时候也还是会聚集在一起，我曾经观察最明显的就是肝细胞，很容易聚集成团。
细胞聚集和污染差别太大了，很难混淆的，建议你多看看污染方面的知识。
另外，可以多问问和你培养相同细胞的朋友，看看他们是否也是这种情况，如果都是这样，那就可能只能如此，如果别人能均匀培养，那么就得从自己身上找原因。
不过我倒是有一点经验，那就是细胞密度不要太高，这样细胞聚集成团的几率就大大减少了。
消化可能也与聚集有关，但没有确切的依据。
我不同意楼上的最好不要吹打的说法，将吸管沉到底部，轻柔吹打，一般不会对细胞造成损伤，再说，如果不吹打就接种，岂不是聚集更严重么。
就知道这些，希望对你有帮助！
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

把血清浓度降一下，降到3~5%左右，看看如何？
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缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先：传代是换新的培养瓶吧？如果不是换新的培养瓶看看还聚不聚集。
其次：先加培养液，然后将离心后的细胞用1ML左右的培养基溶解吹打均匀，后加入加有培养液的新培养瓶中。
然后：放入培养箱时注意左右晃一下，使细胞均匀分散。
最后：放入培养箱后不要再拿出来看，等一天或大半天细胞贴壁之后再拿出来看。
这样如果还聚集那可能就是细胞的原因了
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我昨天293细胞传代，一瓶长得很好，一瓶却聚团长，很难看。
就是瓶子没洗干净的缘故
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有养过hela，不知此细胞是否会分泌粘液一类的物质，我养的ht-29 就这样，即使消化时分散成单个细胞了，之后还是成团的，仅供参考
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发表于 2012-9-9 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意,我养的HELA也是这样,同学养的就没问题,最近发现聚团严重的细胞其消化时间明显缩短。吹打没有太大作用,有的聚团很紧密,离心之后能好一些,强烈建议换新瓶。
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发表于 2012-9-9 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也养hela 以前细胞状态好的时候没有这种情况 现在细胞状态不好 就这种情况
感觉消化下来后 离心后吹不开 总有絮状漂浮的细胞块
种进培养瓶也经常是聚堆。
这次我的胰酶中加入了EDTA 不知道会不会好点
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2012-9-9 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先加0.1%明胶与瓶作用一段时间，弃去，再加培养基，效果很好
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