【求助】细胞消化后，分散不开怎么办

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标题:【求助】细胞消化后，分散不开怎么办

xyw5[使用道具]
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发表于 2012-9-9 15:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我刚买了一瓶MCF-7细胞，用胰酶消化了10分钟，吹打了几百下，细胞还是没分散开，传代后贴壁也不是太好，怎么办那。

TNT[使用道具]
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发表于 2012-9-9 15:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

试试用EDTA消化

c86v[使用道具]
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发表于 2012-9-9 15:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养液倒干净了?血清成分可抑制胰酶作用!还有加完胰酶后可在孵箱里多放一会儿!

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-9-9 15:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我没有养过这种细胞，但是我养过鼻咽癌细胞。这种细胞的贴壁能力很强，用0.5%胰酶（含0.1%EDTA）一般要消化12~15min。我的经验是细胞用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化（避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性最强）至细胞收缩变圆（可显微镜下观察）且有少许细胞脱落（有流下来的趋势），随后立即弃去胰酶（如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶），加入培养基仔细吹打（不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状）。一般我都离心一次弃去上清（去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片）。

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-9-9 15:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

养过这种细胞,的确比较难消化,但也不至于这么难吧?建议不要让细胞长得太满,因为这样很容易在消化时一团一团的下来,另外，加入新鲜培养液后吹打后,可以将其转移到离心筒中，用枪头再多吹打几次,在转移回去,这样可能效果比较好!

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-9-9 15:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位的帮忙，细胞的确长得满了，也没有EDTA，下面我用各位的建议试一下看看

xue258[使用道具]
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