【求助】细胞不好消化怎么办啊！

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标题:【求助】细胞不好消化怎么办啊！

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发表于 2012-9-10 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如题~

star#room[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在胰酶中加些EDTA试试呢

star#room[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有胰酶是不是放时间长了？
时间一长胰酶就不好用了
化一瓶新的，或者新配一些吧

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发表于 2012-9-10 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也在养鼻咽癌CNE细胞.消化时没有出现你所说的问题,两分钟左右就可以消化的很好.你最大的可能是胰酶失活,建议充配,配后分小瓶装(5-10ml),-20度冰箱保存.准备工作做好时在拿一小瓶出来用,如果用时胰酶大部分成液体时估计就失活了,所以要把握好时间,用后马上冻存,最好一次用完.另外我们用的胰酶加了EDTA,建议试一下,配方书上很容易找到.

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

注意以下几个方面:
1. 吸除培养液后, 要用PBS彻底清洗以去除血清, 残留血清肯定会影响胰酶消化.
2. 胰酶的问题: a. 胰酶浓度:一般细胞消化可用0.05%胰酶, 消化困难者用0.25%胰酶, 进口胰酶效果肯定比国产的好。b. 胰酶不能反复冻融，也不能反复37度预温，必要的话可分装使用。c. 胰酶保存问题，胰酶逐渐失效。

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1、胰酶的温度
2、加点EDTA
3、pH值8.0

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养食管癌细胞，用的是0.25％胰酶，没加EDTA，平时放在4摄氏度冰箱保存，消化大概1分－1分半钟，效果很好！现在传代基本不用显微镜观察细胞变化，每次以我的速度默数到60！

xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位老师，我是养细胞的新手，最近养鼻咽癌CNE1细胞，但是消化的时候很费劲，在孵箱中消化6分多，细胞吹打后还是不下来，怎么办啊，有什么好办法赐教？

————————————————————————————————————————————————————————————————

这个问题以前有过讨论，总结一下：
1，细胞不好消化，其原因可能是不是胰酶的活性有所降低，比如配制时间长了等；或是由于胰酶刚刚从冰箱里拿出来，温度没有达到其活性可以最大发挥的温度，所以个人曾经试过：如果在用之前把胰酶先放于37度温箱中孵育4－5分钟再用，其效果较从冰箱里拿出来就用要好。
2，是不是消化之前瓶里的小牛血清没有完全去除干净，这一点是很重要的，小牛血清对胰酶的抑制作用还是比较显著的。所以正如以上一位楼主所说：消化之前，一定要充分去除残留的小牛血清，PBS或是不含小牛血清的培养液都可以。
3，有人说胰酶里加EDTA，是可行的，但是要注意的是EDTA对细胞是有伤害的，所以在洗涤时要充分洗涤，以最大限度的去除EDTA对细胞可能带来的伤害。
4，可以尝试一下：在消化细胞前，先将细胞培养瓶或板放于碎冰上捂3－5分钟，这样做的目的是让细胞伪足收缩，使细胞与瓶底之间的贴壁性降低有利于进一步发挥胰酶的消化作用，这个方法自己曾经试验过，效果不错。

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发表于 2012-9-10 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您说的2和3我都作到了，4的方法没试过。但是不知道放到冰上再消化时放到孵箱里时，冰的作用又没了啊？

xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-9-10 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 HPLC使者 于 2012-9-10 12:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
您说的2和3我都作到了，4的方法没试过。但是不知道放到冰上再消化时放到孵箱里时，冰的作用又没了啊？

从冰上取下后，直接就消化了！祝您好运！

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