手性分析

請教各位有關於Pramipexole dihydrochloride monohydrate之enantiomeric purity analysis除了用chiral column—Chiralpak-AD外,還有其他方法嗎
謝謝

[ 本帖最后由 andy52042 于 2009-7-15 11:55 编辑 ]

若没有手性柱的话，楼主可以尝试在流动相中添加β-环糊精——手性流动相添加剂法，利用Formation of pramipexole-cyclodextrin complex，cyclodextrin inclusion作用差异而达到手性识别的目的。试试吧。

另外，若有CE的话，也可以考虑，在buffer中添加β-cyclodextrin as the chiral selector。

多去尝试！

做手性分离，无非手性固定相法和手性流动相添加剂法，创建一个手性环境，既然排除了前者，那就多试试后面的方法。

good luck!

ps: 楼主可试试这个条件，
HPLC conditions
C18 150*4.6mm 5um
Mobile phase: 30%ACN:70%25mM potassium phosphate buffer, pH 6.4+ 20 mM β-cyclodextrin
Flow rate :1.0mL/min
Detection: UV 220nm
Column temperatute:25
Sample concn: -0.5mg/mL in water

[ 本帖最后由 aa_tang 于 2009-7-10 15:47 编辑 ]

环糊精的手性柱试一试看！当然还是CSP方法；
毛细管电泳也可以；
手性流动相也可以试一试！

謝謝 你們提供的方法 我會試試看

請問
1.關於potassium phosphate buffer, pH 6.4是potassium phosphate monobasic 還是 potassium phosphate dibasic
我是選用potassium phosphate monobasic

2.關於20 mM β-cyclodextrin的濃度, 因為β-cyclodextrin的對水的溶解度為1g溶於100ml的水, 而20 mM β-cyclodextrin
若配置0.5L的話,需稱11.3498g的β-cyclodextrin溶於500ml的水,因此對於分析上就會有一些有問題,所以我先配置
10 mM β-cyclodextrin試試看,不知道對分析上是否有任何影響

3.關於Detection: UV 220nm的部份,因為Pramipexole dihydrochloride monohydrate的UV Max:261nm(MeoH),所以
Detection選擇 UV 220nm是否有其特殊意義,但是因為我的Detection為PDA,因此在分析而言尚稱不上是問題

以上疑問,敬請各位先知解答 謝謝

[ 本帖最后由 andy52042 于 2009-7-15 11:54 编辑 ]

1、选用potassium phosphate monobasic（磷酸二氢钾），可以的。KH2PO4 水溶液呈酸性，得用NaOH or KOH调节溶液至所需pH值。（为方便操作，可考虑先分别配100mM 的磷酸氢二钾和磷酸二氢钾溶液。磷酸二氢钾弱酸性，pH值小于6.4，而磷酸氢二钾弱碱性，pH值大于7；将这两者溶液各取1L，一个滴加到另外一个里面，边滴边搅拌。滴到pH计指示到6.4为止。 然后再稀释用，若pH有变化，则微调一下。）

pH 6.4 在这里是否合适，需得试验后确定。

2、β-cyclodextrin的用量，这是个需要考虑的因素。因为其在水中的溶解度有限，所以在HPLC分析过程中，小心防止其析出。

先配制10 mM 试试看，只要可行，就可以。甚至可以采用更少浓度的（诸如5mM），上面说20mM，是考虑使β-cyclodextrin跟待分离化合物形成包合物时，β-cyclodextrin的量足够。

3、关于检测波长，是这么考虑的，待分离化合物与β-cyclodextrin形成包合物后，紫外特征吸收会有变化的，220nm在考虑背景噪音的情况下，能有效检出。

采用流动相中添加环糊精来手性分离，原理上来讲，一个重要的影响因素就是环糊精的种类及用量（β-cyclodextrin适用性，适用范围更广；也可以考虑用甲基化修饰过后的β-cyclodextrin，更具有特定选择性）；另外一个影响因素就是buffer的pH值，得有利于形成包合物。

楼主试试看吧，也不清楚是否适用于pramipexole？！

另外，pramipexole是碱性化合物，若流动相中添加β-cyclodextrin不可行的话，也可以考虑在流动相中添加D(-)樟脑磺酸(1S)-camphor-10-sulfonic acid，得花时间和精力去尝试。

我試了原先的方法,配製了10 mM β-cyclodextrin,使用WATERS Sunfire C18 &  ATLANTIS DC18 4.6mm *150mm管柱不知道是不是濃度太低或者是pramipexole是鹼性化合物，因此流动相中添加β-cyclodextrin不可行，所以考慮在流动相中添加D(-)樟脑磺酸(1S)-camphor-10-sulfonic acid，但是不知道要配製多少的濃度...另外D(-)樟脑磺酸(1S)-camphor-10-sulfonic acid是否為(+)-10-camphorsulfonic acid CAS:3144-16-9

回复：andy52042

我个人认为：手性化合物的绝对构型和旋光性之间的关系需要确认，不过可以先试一试看能否分开；关于添加浓度，你可以查看一下相关文献，我作手性流动相的少，更多是CSP拆分。呵呵！欢迎多交流。

对的，D(-)樟脑磺酸 (1S)-camphor-10-sulfonic acid  就是(+)-10-camphorsulfonic acid ，CAS:3144-16-9

樟脑磺酸的用量通常为2mM（0.5-5mM都见到过，文献报道。）

可参考这篇文章，若楼主看不到全文的话，偶可以提供。呵呵。。。

The Preparative Scale Reverse Phase HPLC Separation of Epimeric Alkaloids Using Camphorsulfonic Acid as an Ion Pairing Reagent
Paul S. Salva;  Gilbert J. Hite; James G. Henkel
Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 1520-572X, Volume 5, Issue 2, 1982, Pages 305 – 312
cuturl('http://www.informaworld.com/smpp/ftinterface?content=a762736942&rt=0&format=pdf')

嗯, 若我不到全文,可以提供給我嗎。謝謝。

HPLC conditions
C18 150*4.6mm 5um
Mobile phase: 30%ACN:70%25mM potassium phosphate buffer, pH 6.4+ 2 mM (+)-10-camphorsulfonic acid
Flow rate :1.0mL/min
Detection: UV 220nm
Column temperatute:25
Sample concn: -0.5mg/mL in water

以這個條件再試試看嗎