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标题:【求助】MTT法OD值总是很低

jkobn[使用道具]
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发表于 2012-9-12 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】MTT法OD值总是很低


我用MTT法检测抗肿瘤药对胃癌细胞的抑制程度，96孔板重复数次，490nmOD值总在0.1-0.3之间，具体操作参考园子里的方法，不知如何解决。另外我们实验室没有平板离心机，加DMSO前总有部分细胞被吸掉，该怎样解决？
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ero11[使用道具]
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发表于 2012-9-12 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你指的是用单波长测的值这么小吗?如果是单波长测的,我觉得就太小了,如果是双波长测的那还勉强可以,还有一个问题,你铺板的细胞的数量是多少呀?是不是太少了,如果是做损伤,我觉得该多铺点.
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-9-12 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是用单波长测的,细胞数大概5000-10000/ml 左右,如果按照您的方法,提高细胞浓度,那么药物的抑制效果是不是反映的不太准确了?
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发表于 2012-9-12 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

说说偶的经验哦：
1。细胞浓度5X10的4次方，做出来的细胞对照的OD值，24小时的就很好了！——小于24小时的OD值没测过。

所以你的放置时间是多久呢？——如果不用平板离心机离心，而且细胞贴壁时间有很短，那细胞容易被吸掉的！

2。你的摸索药物浓度时的细胞的浓度是多少，做的时候所有的细胞浓度都用相同的就可以啊！不理解你“提高细胞浓度,那么药物的抑制效果是不是反映的不太准确了?”这句话是什么意思！——因为做的时候有细胞对照啊，也就是阴性对照！
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发表于 2012-9-12 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我要做抗癌药物对胃癌细胞的的抑制效果,想做MTT,但是我没有规范的操作方法,很着急,希望各位同门能够帮我,谢谢!
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发表于 2012-9-12 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMSO 570nm试一试？
细胞浓度好像低了点
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-9-12 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不理解你“提高细胞浓度,那么药物的抑制效果是不是反映的不太准确了?”这句话是什么意思

————————————————————————————————

对不起,可能我表达不太好,大概意思是对药物的敏感度下降了.
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-9-12 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对不起,可能我表达不太好,大概意思是对药物的敏感度下降了.

————————————————————————————————————————————————————————————————

如果觉得细胞浓度大了，怕药物作用效果下降的话，可以相应地提高药物浓度啊！

——是这个意思吗？不知我理解的对不对？

MTT来检测药物的作用效果，本来就是要先摸索最佳的药物浓度，及作用时间的！
——细胞浓度是以前的老师做过许多的实验，觉得在96孔板里做肿瘤细胞的药敏的最好浓度，72小时以内都可以用的！
——72小时以后阴性对照组的细胞因长的快，营养跟不上，就失去了对照的意义。

当然，可以根据细胞大小的不同，来调整细胞浓度的！
——调整的时候要注意：细胞太少，在药物作用的时间内（如果细胞和药物同时加）还达不到指数生长，不能反映药物的作用；如果细胞太多，96孔板底面积不够大（细胞是贴壁生长的），也会影响细胞的生长，进而影响药物的作用效果！
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-9-12 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也用MTT法做肿瘤药物的筛选，总共做五种细胞，有一种胃癌的，BGC823细胞，我觉得jenray的细胞浓度有点低，我做的30000个/ml左右，595nm处测的结果还很理想。不过我最近的平行性不好，不知道为什么，有时候同时铺的两块板加同样的药物处理得出的抑制率竟然相差20％，郁闷之级，老板气的都要停我的实验了。哪位发表一下看法？还有你们的数据都怎么处理？借鉴一下。
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jkobn[使用道具]
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 小中大

谢谢e楼上的指点,刚看了一篇贴子
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1311620')
每孔细胞数1000－10000个,而我误认为1000－10000个/ml,稀释近5倍!的确犯了一个低级错误.以后还望请各位多多指教.
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