【求助】如何消除或减弱PC12细胞间的聚集成团？

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】如何消除或减弱PC12细胞间的聚集成团？

19 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】如何消除或减弱PC12细胞间的聚集成团？

北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2012-9-12 12:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PC12传代次数多后，细胞间的聚集加重，常形成较大片或较大团。不知有没有什么好的方法将细胞团分散成单细胞？

吸管反复吹打并不能有效将大团分散开，0.25％Trypsin&EDTA在将细胞团分散开之前就已经破坏了大量细胞，释放出DNA并与许多散细胞粘在一起形成白色的较大片状物。

急盼诸位帮助！

北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2012-9-12 12:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就与ATCC高密度培养时粘联的景象一样，但传代时密度降低还是有些细胞是这样的，以前并没有这么严重。

附件

2012-9-12 12:26

44127716.snap.jpg (50.98 KB)

greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2012-9-12 12:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以试试低速离心把团块离掉,
比如300rpm, 2min,
取上层.

okhaha[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77505
精华 0
积分 548
帖子 756
信誉分 100
可用分 4651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2012-9-12 12:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以用注射器反复吹打，降低马血清用量。

windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态离线

发表于 2012-9-12 12:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也正在养,开始我用吸管反复吹打,而且加大Trypsin作用时间,效果不怎么样..
后来用手直接拍打瓶底或者放1-2ml 在centrifugeTube里面后直接用手甩或敲打桌面..
我觉得这样力量会比吸管吹打有力...不过这样会不会损伤cell就自己衡量拉..

windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态离线

发表于 2012-9-12 12:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想请问, 有么试过用96wellplate 测MTT, 我现在很头疼阿,cell根本就不贴壁,不知你的怎样...?

windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态离线

发表于 2012-9-12 12:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

另外,我有些cell也是传完几代以后就粘联得严重, 会不会是cell贴壁性能变好啦或者开始分化了?

KGZ564[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74472
精华 0
积分 452
帖子 583
信誉分 100
可用分 3756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态离线

发表于 2012-9-12 12:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知你们用什么培养液，我用DMEM培养后，贴的比较好，我用96孔板做过，还可以。

windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态离线

发表于 2012-9-12 12:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的是DMEM 10%Horse + 5%FBS ...试过把FBS提高也不行..
我用的96wellplate还用Poly-l-lysine coated的(公司coated 好的,不知为什么？

北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2012-9-12 12:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的是RPMI 1640+10%HS+5%FBS，
96-well plate用0.1mg/mL的poly-L-Lysine包被过夜（约10h），细胞贴壁挺好的呀。

另外，拍瓶底或离心管敲桌面管用吗，感觉是效果不能好。

19 1/2 1 2 ››