【求助】关于细胞confocol后的计数？

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标题:【求助】关于细胞confocol后的计数？

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教各位：我正在做关于内皮祖细胞的相关试验，其中有用confocol检测该细胞的DiI-acLDL和FITC-UEA1双阳性鉴定，因为我做完confocol后还需对上述双阳性细胞进行计数，但在大量的国内外文献中，只提到了选取若干个随机视野后，用倒置荧光显微镜来计数细胞，使我不能理解的是普通倒置荧光显微镜应该只能检测一种荧光，它如何能计数双荧光细胞阳性呢？我已经做到此步骤，因此比较着急，还请高人多多指点？谢谢！

yes4[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 idea2011 于 2012-9-12 12:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教各位：我正在做关于内皮祖细胞的相关试验，其中有用confocol检测该细胞的DiI-acLDL和FITC-UEA1双阳性鉴定，因为我做完confocol后还需对上述双阳性细胞进行计数，但在大量的国内外文献中，只提到了选取若干个随机视野后，用 ...

谁说的
配置不同Filter就可以的

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教主任，是否所有荧光显微镜都能配制Filter, 调节后的荧光颜色是前两种荧光的混合颜色（和confocol一样）吗？你能否解释的详细一点，因为我对荧光显微镜是外行！谢谢！

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，请教一个问题，请帮忙啊：我的实验和你的差不多，结果看不到绿色，红色可看到。步骤:先用2.4ug/ml的DiI-acLDL37度孵育1小时，随后2％多聚甲醛固定后PBS清洗，再用10UG/ML的FITC-UEA-1（溶在说明书中要求的PBS中，里面有HEPES、NaCl、Ca＋＋、NaN3）37度孵育1小时，随后倒置荧光显微镜检测，请指点一下，我哪步有问题，

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再请教主任，普通荧光显微镜和倒置荧光显微镜都有此项功能吗？我对于荧光显微镜真的一窍不通，还请主任耐心指点！谢谢！

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上您好，我做的步骤和你差不多，只不过我将FITC-UEA-1溶在生理盐水里。

any333[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 idea2011 于 2012-9-12 13:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼上您好，我做的步骤和你差不多，只不过我将FITC-UEA-1溶在生理盐水里。

多谢！请教：FITC-UEA-I的溶剂说明书上有，你为什么不用呢？是嫌麻烦还是？本来分离细胞要用PBS的，我嫌麻烦因每次要配很多，所以我现在用生理盐水（NS）.我现在不出结果，我也想换成生理盐水试试，今天又做了一次，溶在培养液中也可以染成绿色。FITC-UEA-I的溶剂是什么（说明书上的PBS、NS、培养液）到底重不重要呢？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加不同的Filter可以分别观察相应波长的，不是所有的显微镜都可以，还是问一下您所使用的显微镜的保管人员吧
BTW：与倒置与否无关。

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢主任，那调节后荧光颜色可否达到如confocol类似的两种荧光混合颜色的效果？因为我需要计数双阳性细胞。

eric930[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

只能分别观察，可以通过软件间接计算出两种均呈阳性的细胞（当然是观察几个视野后取得的数据），以及各自的细胞数

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