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标题:【求助】transwell的趋化实验

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】transwell的趋化实验


最近要用transwell做趋化实验,看了园子里的一些帖子,获益菲浅,但还是有一些不明白的地方(还没有做过,缺乏感性认识):
1.我用的细胞是贴壁细胞,在趋化过后是不是穿过膜的细胞多数应该黏附于膜的下表面?也有一些会悬于下室液体中或是黏附于24孔板低呢?计数时如何才能将所有穿过膜的细胞都不漏过?
2.染色时该如何操作?是不是要把膜取下来,然后泡入结晶紫染液?怎么取呢?是把每个孔的膜单独切下来吗?(全凭想象,问题可能挺傻的,大家见谅)

请各位有经验的战友多多援手,这里先谢过了!
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49888[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.我用的细胞是贴壁细胞,在趋化过后是不是穿过膜的细胞多数应该黏附于膜的下表面?也有一些会悬于下室液体中或是黏附于24孔板低呢?计数时如何才能将所有穿过膜的细胞都不漏过?

第一个问题：控制实验时间的目的就是要控制细胞穿过膜后，又掉到24孔板底！
细胞是贴在膜的下表面。一般24小时细胞不至于掉到液体中！（穿过膜的细胞是先贴在膜上长，多了才会掉下去。）

2.染色时该如何操作?是不是要把膜取下来,然后泡入结晶紫染液?怎么取呢?是把每个孔的膜单独切下来吗?

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染色的时候单独把膜取下来，浸泡染色就可以了。你说的办法是正确的。操作一下就明白了，那个膜很好取的。
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我从来不取下这个膜，洗洗可以重复利用的。好的很。哈哈。
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发表于 2012-9-12 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼上的老兄，我想用transwell做细胞的共培养实验，在哪有卖？用时须注意什么，
再可否留个联系方式，有问题可以联系请教？
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发表于 2012-9-12 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我从来不取下这个膜，洗洗可以重复利用的。好的很。哈哈。

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若能反复用当然最好了,省银子嘛!呵呵
那应该不能进行染色了吧?该如何统计趋化过来的细胞数量呢?
谢谢!
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
若能反复用当然最好了,省银子嘛!呵呵
那应该不能进行染色了吧?该如何统计趋化过来的细胞数量呢?
谢谢!

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Corning的说明书上写必要时可以用胰酶消化下来的
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-9-12 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上的老兄，我想用transwell做细胞的共培养实验，在哪有卖？用时须注意什么，
再可否留个联系方式，有问题可以联系请教？

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您得告诉大家您在哪儿啊，我（上海）从Corning买的
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发表于 2012-9-12 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Corning的说明书上写必要时可以用胰酶消化下来的

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个人认为这种方法不好，原因：本来穿过来的细胞就不是很多，不像平时从培养瓶里看到的那么多，再经过消化，吸出来，滴片，再数等等，这几个过程下来，好多细胞都被粘的到处都是 了！——意思是，中间不骤太多，影响计数！
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avi317[使用道具]
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 小中大
我在北京，请问哪个公司有卖？单价多少？
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 小中大
北京？！
Corning总部就在北京啊
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