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标题:【求助】MTT法与LDH释放的相关性问题

am10[使用道具]
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【求助】MTT法与LDH释放的相关性问题


我在做细胞损伤实验的时候,发现一种药物,同样剂量下,相同的损伤模型,MTT法与LDH释放的量,这两种评价指标截然相反,是我做错了还是可以解释呢?
请各位指点迷津!谢谢!
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hyuu[使用道具]
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你的意思是MTT显示的细胞损伤越厉害的,LDH释放越多还是越少?
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daod[使用道具]
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MTT实验是对线粒体内膜上琥珀酸脱氢酶活性的检测:

琥珀酸脱氢酶是琥珀酸氧化呼吸链(氧化呼吸链之一)里重要的复合酶之一,它可以催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,从而使FAD接受两个氢原子生成FADH2,然后再将氢传递给CoQ,生成CoQH2,继续呼吸链的电子传递过程。当琥珀酸脱氢酶活性增高时(如细胞增殖等情况),就会催化MTT生成更多的紫红色不溶性的有色产物。---所以凋亡时琥珀酸脱氢酶活性并不一定会降低,所以MTT法不适合去检测细胞凋亡,而坏死或晚期凋亡常常伴有能量合成的障碍,所以琥珀酸脱氢酶活性可能会发生变化。

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LDH实验也叫乳酸脱氢酶释放实验,

乳酸脱氢酶是细胞能量代谢(糖酵解)中的一个重要的酶,可以催化乳酸生成丙酮酸,同时产生ATP。如果细胞死亡,胞膜破裂,那么LDH也就从胞浆中释放出来,因此LDH是质膜完整性的标志,也是检测细胞死亡的指标,LDH升得越高就说明细胞损伤得越严重。
这是我们也就不难理解在急性心肌梗塞或肝炎时为什么要检测LDH了吧!
乳酸脱氢酶法(LDH)有专门得试剂盒,应该是检测细胞死亡的一个较好而且方便的指标。

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所以我个人认为:细胞损伤实验时用LDH释放实验更合理一些。
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ero11[使用道具]
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就是说LDH释放增加,而MTT实验还有增加的趋势,抱歉,我没说太清楚
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am10[使用道具]
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就是说LDH释放增加,而MTT实验还有增加的趋势,抱歉,我没说太清楚

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你检测的LDH是细胞内的,还是细胞分泌的,以及检测的方法?
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33号[使用道具]
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对于测某化学物质对细胞的IC50即半数抑制浓度的时候,MTT法和LDH法哪个更加合适些?IC50实质上是指细胞损伤还是更进一步意义上的死亡?
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daod[使用道具]
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我测定的是细胞培养液上清中的,方法是比色法。
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园丁##[使用道具]
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其实,主任已经回答这个问题了。
MTT和LDH释放反映的是不同的问题,因此得到的结果不同也是可能的。
另外,MTT的结果也可能和很多别的结果不一致的,比如凋亡。
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园丁##[使用道具]
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对于测某化学物质对细胞的IC50即半数抑制浓度的时候,MTT法和LDH法哪个更加合适些?IC50实质上是指细胞损伤还是更进一步意义上的死亡?

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常规都是用MTT的,通过MTT反映细胞增殖和活力,所谓的IC50就是半数抑制率。
如果用LDH,得出的应该是ED50。
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49888[使用道具]
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LDH增加说明膜通透性放大 也就是膜结构损伤可能加剧

MTT增加只能说细胞能量供应活跃。

感觉LDH增加判断是准确的 而MTT增加可能是早期细胞对逆境胁迫的一种应激.

如能延长处理时间 如 从24小时改成48小时再测定 终究MTT会降下来的.我认为。

还有 坏死比凋亡释放的LDH要多 凋亡早期MTT增加也很正常 这两项都是笼统的指标 都不适合于判断凋亡或者坏死的比率.

以上为我个人看法。
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