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标题:【求助】悬浮细胞的免疫组化方法和试剂

hold住[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】悬浮细胞的免疫组化方法和试剂


本人打算年后开始做外周血单个核细胞的免疫组化，该细胞为悬浮细胞，请各位同仁指教！谢谢！
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能不能说的详细一点?比如实验目的什么的，指教说不上，或许可以谈谈我的想法供你参考
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以，楼上的
我要测的蛋白主要表达在CD8+T细胞的胞浆中，我打算分离人外周血单个核细胞并施加一种物质，作用不同时间后，用免疫组化的方法观察蛋白表达量有无变化，已知人的单个核细胞悬浮生长，所以请你指点一下方法和步骤！
不甚感谢！
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我要测的蛋白主要表达在CD8+T细胞的胞浆中，我打算分离人外周血单个核细胞并施加一种物质，作用不同时间后，用免疫组化的方法观察蛋白表达量有无变化

————————————————————————————————————————————————————————————————

首先提醒你：免疫组化要定量检测的话有点难度，做了之后你用什么方法来分析，才能达到定量的效果？——偶只知道一种，图象分析。如果标记了荧光物质，那么还可以用激光共聚焦定量！
定量检测蛋白质的表达还有其他方法，你可以再找找那种最好！

如果你只想用免疫组化，那么可以做细胞甩片（有点象细胞爬片，不过有一种专门的甩片机），也可以用类似ELASA的方法做！——先用多聚甲醛包板，再加细胞悬液（用PBS洗过的），离心（为使细胞能尽量贴紧孔壁）后，在孵箱里放置12小时左右，然后就按照免疫组化的步骤做，但不需要修复抗原。
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的
我不打算用定量的方法-因为没钱啊
就在显微镜下面人工计数了
麻烦能给出详细的步骤和试剂生产厂家吗？
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你要哪个方法的具体步骤呢?
试剂要根据你的方法选择!
单纯的免疫细胞化学，个人认为福建迈新和北京中山的都可以，质量较好！
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的
我想用ABC法，并且是悬浮细胞的
你有吗？
谢谢！
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-9-14 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道楼上 站友有没有做过其他细胞（包括贴壁细胞，组织切片的）的免疫组化染色？如果做过，那么悬浮细胞免疫组化的主要过程与贴壁细胞，组织切片的都基本相似。有区别的地方就是在开始时制作悬浮细胞的细胞片！有两种方法：

1。如果有离心甩片机，直接用该仪器将细胞转移到玻片上，具体的步骤该仪器上都有。
2。如果没有离心甩片机，可将细胞离心沉淀后，用细胞悬液涂片，方法与准备血涂片的方法差一致（注意：要达到最适合的细胞涂片厚度，就要多试几次了）
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