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标题:【讨论帖】人类各部位肿瘤细胞培养

ffooll[使用道具]
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发表于 2012-9-15 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】人类各部位肿瘤细胞培养


拜托各位大虾，因我要开展肿瘤药物敏感检测，

请指教人体手术下来的肿瘤组织，各种部位肿瘤细胞培养的方法有何不同？

谢谢！最好有一些步骤指导特定部位肿瘤细胞的培养。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-9-15 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
假如没有必要非得自己建立肿瘤细胞系的话，可以考虑国际共用的细胞系，这样实验结果也比较容易公认一些。
不同肿瘤细胞原代培养的方法是不同的，贴壁的或者悬浮的，请说清楚点要求。
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发表于 2012-9-15 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢关注，
我目的是用医院的新鲜肿瘤标本去做药物敏感检测，投入临床应用。
这些新鲜标本包括脑胶质瘤、甲状腺癌、乳线癌、肺癌、胃癌、肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌等等一系列人体恶性肿瘤。
我知道这些不同类型肿瘤原代培养方法肯定有不同，就是不明确哪些肿瘤该用什么办法培养。
期待有所答案。

再次感谢！
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发表于 2012-9-15 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我记得以前看过关于心肌细胞培养的文献，早期的心肌细胞体外培养方法多是采用体外灌流（含消化液）取出活的心肌细胞，然后体外培养，用于实验。
我觉得你的实验可以借鉴以上的方法。
先取得肿瘤标本，然后采用消化（或者匀浆等）的办法，获得活的肿瘤单细胞，然后进行体外培养。培养以后可以用于实验的。
至于去除培养中污染的细胞，不同的肿瘤组织，污染的细胞也不同，可能大多是成纤维细胞。你可以采用差速贴壁纯化的方法，去除成纤维细胞等等，获得纯度较高的肿瘤细胞。
另外关于药敏检测指标，可以先用MTT，有了眉目以后，再作流氏、Westhern等。
以上方法仅供参考
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发表于 2012-9-15 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢关注，
我目的是用医院的新鲜肿瘤标本去做药物敏感检测，投入临床应用。
这些新鲜标本包括脑胶质瘤、甲状腺癌、乳线癌、肺癌、胃癌、肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌等等一系列人体恶性肿瘤。
我知道这些不同类型肿瘤原代培养方法肯定有不同，就是不明确哪些肿瘤该用什么办法培养。
期待有所答案。

再次感谢！

————————————————————————————————————————————————————————————————

别客气，互相学习。尤其，在肿瘤领域，我还是个新手。
想知道，你这么的做法是否有文献报道。
细胞培养出来肯定是没有问题，只是想知道这样的做法是否可行？我和victoh 主任讨论了一下。如果可以的话，请提供一下相关文献，把文章题目(最好有外文的)列出给我就好。
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发表于 2012-9-15 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

网络搜索“ATP-TCA”，就可获得所有的文献，作为肿瘤体外药敏检测，国内外不少已经用于临床多年。但其关键还是在于肿瘤细胞的培养。

文献中对于肿瘤细胞的培养，仅局限于某一种或几种肿瘤，也不见详尽。比如肝癌、乳腺癌，胃肠道癌等有所报道，至于皮肤鳞癌、甲状腺癌、肺癌、脑肿瘤等未见中文字样的具体过程。

不知道斑竹及众位高手是否可以不吝赐教？

谢谢。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-9-15 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

深叹学海无涯，希望以后多参与到本版的讨论中来。

青衫建议的方案是：
　　肿瘤单细胞悬液制备：先将新鲜瘤组织剪碎成大小1mm3的碎块，然后加入胶原酶(I型或者II型)消化2-3小时，如果用胰酶，需要考虑中间分次消化，以防消化过度。0.1%胶原酶消化也可以分次消化(30min一次)，这样细胞的活力会好些。
如果用胰酶的话，分次消化，用0.1%左右的胰酶，10-15min消化一次，消化一次，取消化下来的悬浮细胞，用含血清的培养液中和胰酶，离心并用培养液重悬细胞，放置于4度保存，待消化完全后，将消化后的细胞悬液通过160-200目的筛网，即得单细胞悬液。然后，接种到培养瓶中，贴壁1.5h后，除去贴壁细胞(主要是成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞之类的)，就可以得到比较纯的肿瘤细胞，台盼蓝染色计数，然后进行后面的实验。
后面的实验，可以根据你的需要来进行了。
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发表于 2012-9-15 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们也学了一招。

另外还请高手们继续解答楼主的问题，尤其是各种肿瘤细胞的原代分离、纯化，并请将方案加到下面的原代细胞培养帖子里:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1942997&sty=1&tpg=1&age=0')
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2012-9-15 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢斑竹给我的这些信息，其中有我知晓和一些暂不清晰的概念。

但我最想知道的是：细胞培养过程大致相同（分贴壁、悬浮两类），但各种类型肿瘤细胞都有其特性，比如乳腺癌、肠癌、甲状腺癌、脑胶质瘤等是否都属于贴壁型的培养方式呢？假如各种恶性实体肿瘤都属于贴壁型的，那是否在培养中有何不同、特定位置的肿瘤在培养中是否有一些具体不同点?
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-9-15 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢斑竹给我的这些信息，其中有我知晓和一些暂不清晰的概念。

但我最想知道的是：细胞培养过程大致相同（分贴壁、悬浮两类），但各种类型肿瘤细胞都有其特性，比如乳腺癌、肠癌、甲状腺癌、脑胶质瘤等是否
都属于贴壁型的培养方式呢？

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你列举的那些细胞株均为贴壁的，一般实体瘤的肿瘤细胞都是可以贴壁的，而且贴壁时间都长于成纤维细胞和内皮细胞(因此可以差速贴壁纯化)，可能血管瘤的细胞除外(具体不太清楚，因为它是内皮来源的)，而腹水瘤和白血病肿瘤细胞往往都是悬浮的。
一般来说，选用肿瘤细胞大众型适合的RPMI1640＋10%小牛血清(或新生牛血清，建议用进口的Hyclone或Gibco)＋双抗就普遍适合了。
选取肿瘤的时候，坏死的和中间的部分最好不要，这个我想你也应该知道的。另外，细胞在消化的时候，同一批次的实验最好采用同一份肿瘤，消化下来的细胞随机混合均匀后，再分成各个组，所以不存在位置不同或者取材不同的个体差异了。
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