小中大两年前我做过原代神经细胞培养,细胞长得不错。现在回想起来,有以下几点需要注意:
1.培养基的选择很重要。我用的是DMEM(高糖),除了加抗生素外,还加了一些胰岛素、有时还加些NGF。
2.新生鼠的选择也重要。出生时间越短越好,不能超过12小时,最好是胎鼠。
3.培养板要用新的。当然,如果做得很老练了,也可以用回收的(省钱嘛),但如果养不活,损失更大。
4.培养板要用多聚赖氨酸包被,细胞才能贴壁。
5.操作过程的细节要注意,这样才能保证细胞能活、长好。如在消化细胞时掌握好消化酶的浓度和时间;定期、及时给细胞换液;换液时要注意操作手法,减少对细胞的损伤;先将培养液预温,减少不良刺激……
零星想到这些,希望能有用。不要灰心,神经细胞也许养起来稍微麻烦些,一旦找到窍门,也都一样。相信你会成功的