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标题:【求助】关于神经元原代培养的问题

羊咩咩[使用道具]
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1
 

【求助】关于神经元原代培养的问题

我做原代培养已经好几个月了,可是细胞状态一直不好,十天以后还能存活的很好的几乎没有!
师姐从国外回来,说是在国外随便养养都能活一个月的。可是她给示范了2次,也是活到十天左右就差不多不行了;她用的都是国外带回来的材料,操作也都一样,可以说除了用的新生鼠、水、空气之外,就不知道还有什么大的区别了。
这方面谁有经验可以指教吗??
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羊咩咩[使用道具]
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2
 
刚才没写清楚,用的新生鼠是医科院买的,水是去离子水再蒸了两次的,应该都没什么问题;至于空气,听说上海那面基本都可以养到20天以上,离的这么近,空气应该也没问题吧。
现在都不知道到底哪里不对,真急死我了!~~~~~~
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redbutterfly[使用道具]
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3
 
两年前我做过原代神经细胞培养,细胞长得不错。现在回想起来,有以下几点需要注意:
1.培养基的选择很重要。我用的是DMEM(高糖),除了加抗生素外,还加了一些胰岛素、有时还加些NGF。
2.新生鼠的选择也重要。出生时间越短越好,不能超过12小时,最好是胎鼠。
3.培养板要用新的。当然,如果做得很老练了,也可以用回收的(省钱嘛),但如果养不活,损失更大。
4.培养板要用多聚赖氨酸包被,细胞才能贴壁。
5.操作过程的细节要注意,这样才能保证细胞能活、长好。如在消化细胞时掌握好消化酶的浓度和时间;定期、及时给细胞换液;换液时要注意操作手法,减少对细胞的损伤;先将培养液预温,减少不良刺激……
零星想到这些,希望能有用。不要灰心,神经细胞也许养起来稍微麻烦些,一旦找到窍门,也都一样。相信你会成功的
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羊咩咩[使用道具]
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以上提出的几点我是这样做的:

1.培养基我用的是DMEM,加了抗生素,但没加胰岛素和NGF;现在正在尝试用NB和BME,不过效果好像也不明显。
2.新生鼠的选择上,我用的是24小时内的,最近都开始用胎鼠。
3.培养板~555~~培养板,我经常用回收的,就是为了省钱!要么我这几次都用新的试试看。
4.培养板我每次都用多聚赖氨酸包被的。
5.此外,可能操作过程的细节我还要更注意吧~~

总之,我很赞同水晶姐姐说的一旦养好了也就养好了,唉,可能我还没做顺吧~~~~
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5
 
测量一下培养箱的温度和CO2浓度是不是正常,培养箱内部干不干净等
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羊咩咩[使用道具]
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6
 
嗯嗯,我们也一直对培养箱抱有疑问,可是看看仪器又是正常工作的,所以暂时把它当作没问题。
请问楼上的朋友,你认为培养箱的温度和气体浓度应该在多少范围内是比较好的呀?仪器自身显示没问题可以吗?~~
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7
 
上次忘了说,我的培养基中加了10%的马血清和10%的小牛血清。我试过用10%的小牛血清,结果不如加马血清的效果好。
一般来说,如果培养箱的显示指标正常,培养液的颜色正常(表明pH变化不大),应该没有大的问题。
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小螺号[使用道具]
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8
 
急! 请问哪儿有NM(neurobasal medium)和B27的现货供应?(Gibco公司产品)。谢谢大家!
另外,马血清是否有现货呢?
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9
 
听说加点B27后,效果不错的,你可以试试。浓度1mlB27/50ml培养基。
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ending[使用道具]
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哪位ggjj帮帮忙,告知我哪儿有NM和B27的现货供应?鞠躬!
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