小中大我们抽取外周血分离到单核细胞之后再加入一系列单抗,经藕连二抗的磁珠
分离naive and memory T CELL.
因细胞数量难以满足需要,只能再培养。按照淋巴细胞的常规培养法,加anti-CD3 and anti-CD28(浓度均为100ng/ml),未再加APC CELL及IL-2. 在培养过程中,第一、第二天还好,细胞有增殖,但第三天后,有的细胞成团,也不知是细胞聚集还是增殖的克隆,并出现细胞破裂,第五天细胞已所剩无几。
请教高手:有什么解决办法?是不是细胞凋亡了?
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细胞激活后,高表达FASL和FAS,二者相互作用诱导活化细胞凋亡,这便是AICD。所以你的细胞死亡在一定程度上说是正常的。但活化T细胞必须在IL-2的存在时,才能在体外存活一定时间。本人在T细胞培养方面有不少经验,考虑到你的情况,你可用下列策略:分离到的PBMC,先不分离所需细胞,二是先经PHA或单抗(至于浓度,参考文献即可,不同实验室不同)激活,让细胞增殖,5-7天后,再磁珠分离你所需细胞。细胞激活后,因含有CD4细胞,可分泌IL-2等细胞因子,故此过程不需加入外源性IL-2。但分离后需尽快用于实验,否则,死亡。祝好运!