【求助】有高手帮俺看一下单细胞凝胶电泳的照片吗？

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标题:【求助】有高手帮俺看一下单细胞凝胶电泳的照片吗？

wsll[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

近阶段我带学生实验用SCGE检测醋酸铅对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的体内实验，但结果让人很难解释，并不出现明显的彗星，但随着剂量增加细胞似乎越来越毛糙，如何解释这一现象？（注：每次实验均设阴性对照以及UV照射的阳性对照，且阳性彗星明显，可以排除实验本身的差错）

附件

2012-9-29 12:34

117344-DSCN0983-embed.jpg (74.1 KB)

wsll[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

顺便补充一下，在没有软件分析的前提下，用什么指标可以反映出这种随剂量增加细胞越来越毛糙的现象？

ffooll[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我不是高手，但猜会不会是剂量太小的，细胞膜损伤不够的原因啊？

sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好像细胞没有受到什么损伤

ha111[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的UV与醋酸铅是不是在同一实验条件下进行的？
可能原因（个人意见）：
①醋酸铅的质量是否有保障？有没有过期或变质？
②裂解液及电泳液的pH？试剂的质量？裂解及电泳的时间？温度？电泳液最好是新鲜配制的。
③有没有在暗室中操作？
对于彗星实验，在这里我也有个问题想向各位大侠请教：
以前我是用正置的荧光显微镜（物镜在载物台之上）看的彗星，由于种种原因，现在手头上只有倒置的荧光显微镜（物镜在载物台之下），可我用倒置的却无论如何也看不到彗星！不管我的胶板是正着放（由下而上分别是物镜、载波片、胶及盖波片）还是反着放（由下而上分别是物镜、盖波片、胶及载波片）。哪位大侠用过倒置的荧光显微镜看过彗星，望指教！十二万分的感谢！！！

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发表于 2012-9-29 12:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

无论正置还是倒置显微镜都应该看得到细胞，倒置的荧光显微镜激发光是从下面打上来的，所以载玻片倒过来放。我们的Confocal配的就是倒置显微镜，绝对是没有问题的。谢谢你的分析，祝你好运！

Celia

zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问，你用的是激光共聚焦的倒置显微镜看的彗星吗？
能不能把你用显微镜看彗星的具体操作步骤详细点告诉我？不胜感激！谢谢先！
你所说的载玻片倒过来放是不是我所指的反过来放（由下而上分别是倒置显微镜的物镜、倒置显微镜的载物台，盖波片、胶及载波片）？

wsll[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

平时我用的也是正置的荧光显微镜，但是前阵子刚用Confocal的倒置显微镜看过，我指的倒过来放就是你所说的那样，具体步骤和你用正置的显微镜是一样的，因为无论正置还是倒置只是成像原理不同而已，激发光都是一样的，所以我觉得除了玻片放置有差别别的操作不应有什么差别。我在两台显微镜上观察到的图像没什么差别。

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发表于 2012-9-29 12:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢楼上各位的回复，通过文献资料，我了解到铅除了引起DNA断裂外，还可以产生DNA蛋白交联（DPC),而彗星实验是直接检测DNA断裂的，所以如果存在DPC又没有将彗星实验加以变化的话，可能就产生我所说的现象，验证的话可以将重新做彗星，操作中略加变化，计算交联率就能反应是否存在DPC了。
根据自己的实验摸索以及文献调研，我觉得彗星实验还是一个非常好的实验，现在除了检测DNA单、双联断裂外，还可以检测DNA－DNA交联、DNA-蛋白交联,甚至可以检测凋亡。灵敏度比其他的实验高（比如FADU-DNA解旋荧光分析法），同时操作又很简单，如果配上软件分析系统的话，那就Perfect了！
一家之言！

阿司匹林[使用道具]
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发表于 2012-9-29 12:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我有些地方不明白，还望得到您的指教（请谅解我的愚笨）！
①以前我一直都是用正置的荧光显微镜（物镜在载物台之上）看的彗星。看的时候先让高倍（40×）物镜稍微往下压紧一点盖波片（不能让胶破），然后再边看目镜边上调物镜，就可看到分布在胶的不同层次里的彗星。
现在由于种种原因，只能用倒置的荧光显微镜（物镜在载物台之下），而不管我的胶板是正着放（盖波片在载波片之上）还是倒着放（盖波片在载波片之下），都看不到彗星，因为物镜没法紧压胶板（正置的显微镜有载物台可以撑着）。上次用倒置的荧光显微镜观察彗星的时候，我20倍与40倍的物镜都试过了。20倍的物镜不能与胶板接触，因此我将胶板反过来看，结果仍未观察到彗星，于是我换用40倍的物镜看，40倍的物镜倒是可以与胶板接触，可随着物镜的上调，胶板也随着上升了（因为没有支撑物），结果不管我的胶板是正着放还是反着放，也不管我是用20倍还是40倍的物镜，都没能看到彗星！
不知我讲明白了没有？我的操作步骤与您的是不是有很大的出入？还望您不吝赐教！十二万分的感谢！
②彗星检测凋亡的原理与操作步骤？
急盼您的回复！

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