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标题:【求助】免疫细胞荧光化学问题

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发表于 2012-10-1 19:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】免疫细胞荧光化学问题

昨天做了免疫细胞荧光化学，一张是阳性对照片，剩下的是实验片。（两者是不同的细胞）。结果，阳性对照片有阳性细胞，阴性细胞可看到细胞轮廓。可是为什么我的实验片不说阳性细胞吧，可是连阴性细胞的轮廓都没有？！
百思不得其解！
谁都明白实验不出结果的煎熬。渴望各位的帮助，谢谢！
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发表于 2012-10-1 19:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会不会是细胞在处理过程中脱落了呢？你在普通光学显微镜下能找到细胞吗？

若排除了上述可能，那么就很难解释了——如果你给实验组和对照组的染色操作完全一样的话。
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发表于 2012-10-1 19:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是细胞涂片呢还是组织切片？
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发表于 2012-10-1 19:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的是细胞爬片。在普通光镜下，细胞是存在的。没掉片！
我想是不是两种细胞的膜通透性不同，而引起的?? 为什么会连细胞的轮廓都看不到呢？！
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发表于 2012-10-1 19:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的是细胞爬片。在普通光镜下，细胞是存在的。没掉片！
我想是不是两种细胞的膜通透性不同，而引起的?? 为什么会连细胞的轮廓都看不到呢？！

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你是用什么方法增加细胞膜通透性的？
我们一般在固定液和抗体稀释液中加0.1% 的Triton X-100以增加膜的通透性。
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发表于 2012-10-1 19:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你们用1%吗?!! 天啊,我才用到0.2%(这还是我在试剂说明书的基础翻倍的.!)
提高到1%不会掉细胞什么的?新手不太懂... 浓度高了会有其它的问题吗?
渴望大侠的答复!
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发表于 2012-10-1 19:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你们用1%吗?!! 天啊,我才用到0.2%(这还是我在试剂说明书的基础翻倍的.!)
提高到1%不会掉细胞什么的?新手不太懂... 浓度高了会有其它的问题吗?
渴望大侠的答复!

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楼上写错了。应该是0.1%的Triton X-100。
Triton X-100是种去垢剂，浓度太高会导致细胞膜被破坏，导致细胞形态破坏。
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发表于 2012-10-1 19:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，你们的抗体稀释液是如何的??(配方).
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发表于 2012-10-1 19:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
阳性对照组和实验组是否用同一种抗体，如果不是，能否拿一个实验组抗体有可能能出结果的切片或细胞作为阳性对照。如果这时对照也没有出来，考虑是否在再摸一下抗体效价。
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发表于 2012-10-1 19:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，你们的抗体稀释液是如何的??(配方).

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5％BSA，0.1％Triton X－100，PBS配制，pH7.4
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