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标题:【求助】细胞一夜之间全死了

dotaaa[使用道具]
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【求助】细胞一夜之间全死了

有人向我求救:
说他养了数种细胞,这些细胞要求用不同的培养基。前一天细胞的状态还不错,结果第‘二天一大早就发现,细胞全死了,只有一些贴壁生长的细胞还有极少的细胞还贴壁,估计也不行了。现象是悬浮的细胞出现很多的胞浆颗粒并且细胞都是分散的(正常的情况应该是细胞饱满,透亮,细胞扎堆),悬浮细胞则绝大部分都漂起来了。
这样的事情已经发生过好几次了。经常是一、两周出现一次。
为此,他专门招孵箱公司的人来把CO2和温度都校正了,孵箱的水也没有问题。CO2应该没有问题,同别的实验组用的CO2出自同样的厂家,他们的细胞没有问题。
他向我求救后,我把他的培养基要来,自己养细胞5天没有问题(在别的实验室,重新复苏的细胞),结果细胞长好了之后,那到他那里,好了2天(细胞生长旺盛),第3天突然全不行了。
我觉的自己培养细胞的经验应该不错了,可对这个问题真是没辙了!

孵箱检测了,师傅说没有问题,还会有其它的问题吗?
CO2别的组也在用,应该没有问题。
培养基,我试了,再说他同时在使用多种培养基,同时出问题的几率很小。他只加谷氨酰胺,pH也试过。
细胞污染也解释不了,全部细胞,用不同的培养基,一起污染?而且镜下看不出污染,支原体?也不能同时呀!

看看各位高手有什么经验,这应该属于疑难杂症了!帮我分析一下,这样的情况发生的毫无规律。

先谢谢了,也许您的分析会让我茅塞顿开。
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xueyouzhang[使用道具]
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细胞培养的操作过程是不是有问题?如有时过度使用酒精消毒,挥发的酒精会影响细胞的生长。很像是由于个人操作的问题。
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dotaaa[使用道具]
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3
 
先谢谢你的提醒。
这里所有的东西都是一次性的,养细胞不用酒精。
我想可能不是操作的问题,因为并不是所有的细胞都是同一天换液,有的时候养1、2周都好的,可突然某一天就出问题了,而且是所有的细胞一起。所以,我想一定是哪个共同的因素出了问题,比如孵箱、CO2等,但这些因素目前都基本排除了,也许我的经验还不足,还有什么想不到的地方?
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xueyouzhang[使用道具]
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4
 
哦,我们做细胞实验时,是要用酒精擦手的,有时也要擦台子。
如果换一个孵箱,还是由同一个人来操作,其他一切都不换,会怎么样?再有只有一个可能就是有人为因素破坏,这也不是不可能的。不好意思,一般情况下不应该这样想。
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dotaaa[使用道具]
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谢谢你。
换孵箱的方法也试了,我觉得这是最后一招,结果还是一样,第三天早上,细胞出问题。所以,没办法来求救了。
至于人为的因素,我觉得应该放在最后考虑,再帮我想想还有其它的办法吗?如果想找出问题,还能怎样做哪?谢谢
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xueyouzhang[使用道具]
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细胞死了以后,培养液是变酸了还是边碱了?如果是变碱了,可能是这之前CO2停过。这种细胞同时死亡只能考虑细胞共同的外部环境变化,我实在是没辙了,看看还有没有高手能帮你。
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dotaaa[使用道具]
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培养基的颜色是正常的,也就是pH是正常的。
另外,我觉得中间停CO2的话,一夜好像也不会有问题(我记得以前有一次,把细胞培养瓶的盖子拧的太紧了,第二天培养基颜色发紫,也没有问题,不过可能跟细胞的耐受程度有关)。

anyway, thank you very much!
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你可以试试隔24——48小时换一半培养液试试!我觉得很可能是环境改变造成的,如营养和代谢物等!
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dotaaa[使用道具]
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我觉得最不好解释的是所有的细胞一起出问题,真的很奇怪!因为你养很多的细胞,肯定不会全都一起换液的,可能有的今天换,有的明天换。

谢谢!
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cocacola[使用道具]
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如果没有剧烈的培养条件变化,不可能所有细胞一夜间都死了。
好好找找原因。
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