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肿瘤
我读书时应用MTT作肿瘤细胞株药敏,采用以下文献“周建军,乐秀芳,韩家娴,等。评价抗癌物质活性的改良MTT方法。中国医药工业杂志 1993;24(10):455-6”。该方法为上海中科院细胞所所采用,MTT产物应用三联液溶解彻底,不需振荡,对于悬浮细胞尤其适合,且产物稳定。对于贴壁细胞,他们那时采用SRB方法。
简要方法(我的肿瘤药敏实验):
1. 将一定密度的肿瘤细胞90μl/孔接种于96孔微量培养板内,然后加入药液10μl/孔,每种药5个浓度(每个浓度相差10倍),一个浓度设4个复孔。每块板设一个空白调零孔,内加培养液,不含细胞与药物。每种细胞设6个正常对照孔,加样100μl/孔,不含药物。接种完毕后在37℃, 5%CO2条件下孵育培养48小时。
2.加MTT:
加MTT溶液(5mg/ml)20μl/孔,混匀后37℃,5%CO2 条件下孵育4小时。
3.加三联液:(三联溶解液:SDS 10g, 异丁醇 5ml , 10M HCl 0.1ml 用双蒸水溶解配成100ml溶液)
加溶解三联液100μl/孔,混匀后37℃放置过夜以溶解甲臢。
4.吸光度(A)测定:
用酶标仪测定每孔吸光度,测定波长为570nm,校正波长为630nm。
5.计算:肿瘤抑制率=(对照组A值-治疗组A值)/对照组A值×100%, IC50值用Logit法计算。