细胞世界

有哪位用WST-1做细胞的增殖实验的??
我现在急需有人告知Krebs-Ringer' buffer的配方.
很急很急,请大家指教.
不甚感激!!

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我用过WST-1，但那是ready to use的液体，直接加到孔里就好了，你怎么还要用buffer？有卖干粉的？
查了一下，发现Krebs-Ringer' buffer有很多种配方，不知它们之间使用上有什么区别。你自己用google查一下。

我们买的是ready to use的液体，什么都不用配，取10微升加到96孔板就好了，继续培养0.5h~4h直接用酶标仪检测。

我一直觉得用WST-1测增殖特别方便，因为它的降解产物是可溶性的，
不像MTT法，还要破细胞，要溶解降解产物，中间还要经过离心、弃上清等繁琐步骤，可以说，每多一个步骤，就增加了一些不确定因素。

我只用过这种，真不知道可以用干粉自己配的，不过看来挺麻烦。
顺便问一下，那个1-Methoxy-PMS是做什么的？我就不去查了：）

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对了,我现在刚开始做,有很多东西还不是很清楚,可以问问你吗,你用的是什么细胞??protocol是怎样的??
WST-1的介绍说接着细胞和浮游细胞都可以用.
我现在养的是浮游细胞HL-60,有一个地方还不是处理得很好,就是前培养完之后离心去上清时.96well离心时转数不好掌握,快了怕细胞会受影响,慢了根本就无法分辨沉淀的细胞.很是烦恼.
如你有这方面的经验请多多指教!!

对了,我现在刚开始做,有很多东西还不是很清楚,可以问问你吗,你用的是什么细胞??protocol是怎样的??
WST-1的介绍说接着细胞和浮游细胞都可以用.
我现在养的是浮游细胞HL-60,有一个地方还不是处理得很好,就是前培养完之后离心去上清时.96well离心时转数不好掌握,快了怕细胞会受影响,慢了根本就无法分辨沉淀的细胞.很是烦恼.
如你有这方面的经验请多多指教!!

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我用的也是悬浮细胞，是原代的小鼠淋巴细胞。
protocol其实前面我已经提到过了，就是96孔板，每孔加100微升细胞悬液。细胞密度根据不同细胞类型和不同实验目的有所不同。一般培养你所希望的时间后加入WST-1 10微升，混匀后再37度孵育0.5h－4h（可以做一下预试，哪个时间点实验组与对照组比较显示度最高，一般细胞多时孵育时间长一些），直接用酶标仪进行检测。

根本没有离心步骤，在它与MTT法比较的优越性里我也提到了。
我把boehringer-mannheim公司（现在被Roche收购了）产品说明及protocol（大于200K不能上传）发到你邮箱里吧。
你的邮箱地址好奇怪呀，你给我个确认的邮箱，再发给你吧。

我用的也是悬浮细胞，是原代的小鼠淋巴细胞。
protocol其实前面我已经提到过了，就是96孔板，每孔加100微升细胞悬液。细胞密度根据不同细胞类型和不同实验目的有所不同。一般培养你所希望的时间后加入WST-1 10微升，混匀后再37度孵育0.5h－4h（可以做一下预试，哪个时间点实验组与对照组比较显示度最高，一般细胞多时孵育时间长一些），直接用酶标仪进行检测。

根本没有离心步骤，在它与MTT法比较的优越性里我也提到了。
我把boehringer-mannheim公司（现在被Roche收购了）产品说明及protocol（大于200K不能上传）发到你邮箱里吧。
你的邮箱地址好奇怪呀，你给我个确认的邮箱，再发给你吧。

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哦,不好意思,这几天一直没有上网,几天才看到你的回复.
噢,我指的离心是前培养后去除培养液,消除前培养液对WST-1的影响.所以要另外添加Krebs-Ringer' buffer.
关于邮箱地址,谢谢你的提醒,那是正确地址:gag15057@cc.okayama-u.ac.jp
因为这不是国内的地址.
先谢谢你了