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标题:【求助】关于小胶质细胞的鉴定

guagua[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于小胶质细胞的鉴定


请问小胶质细胞鉴定用什么方法简单又经济？
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能否把你养小胶质细胞的经验和方法谈一谈，
不胜感激，
我也在养小胶质细胞
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

兄弟，你看了你7月3日发的贴吗？我也没有什么经验，也在找高手指导，不过有什么问题，我们可以探讨。我现在的主要的问题在于小胶质细胞和星形胶质细胞的分离，及小胶质细胞的产量问题。你现在主要的问题是什么啊？
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发表于 2012-10-7 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有一种方法是按胶质细胞的一般培养方法培养至第6,7天。此时小胶质细胞可以在显微镜下被观察到漂浮于培养液中。收集这些培养液80g 5分钟离心得到小胶质细胞或把其接种于培养皿中继续培养。

还有方法是常规胶质细胞培养至两周左右，此时星形胶质细胞长于底层，小胶质细胞及少突胶质细胞贴在星形胶质细胞上生长。恒温摇床处理12小时，小胶质细胞及小突胶质细胞被摇脱落。利用小胶质细胞和少突胶质细胞对培养瓶玻璃或塑料的不同粘附特性，将摇下的细胞悬液重新接种于末经基质包被的瓶皿中，37度孵育3小时，令小胶质细胞贴壁，轻敲培养瓶，使少突胶质细胞脱落，舍弃含有小突胶质细胞的培养液，将剩下的小胶质细胞继续培养或传代即可。
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发表于 2012-10-7 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

OX-42抗体或lectin可以作为小胶质细胞的marker！
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发表于 2012-10-7 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多谢两位。
另外，我想请教一个问题：
我现在是用摇床分离法分的小胶质细胞，分离出来后种入培养瓶长得还可以，但是一消化传代就不行了。所以我想是否可以直接种入培养板内，如果可以的话接种密度多少合适（24或48孔板），我看有些文章的实验密度是5次方或4次方级，会不会太低啊？
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发表于 2012-10-7 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你有没有用CSF？
你用的摇床多少转每分转多久？
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没用CSF， 转速是220RPM 2小时
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ha111[使用道具]
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 小中大
你是不是一开始培养的是胶质细胞，养到第几天开始摇？有的是什么血清？你养的小胶质有没有达到实验要求？
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
开始是混合培养，24小时换液洗去死亡的细胞和组织碎片，然后3天换液一次，约12天时分离（看细胞长势而定），用的小Gibico胎牛血清，我现在就是想让它达到实验要求，可是一到分离这一步就不行了。
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