小中大关于细胞冻存问题还真不少。一年前我老板从美国带了五个不同的细胞株回来，其中有的公认很难伺候，但是本人硬是一次搞定，全部存活并冻存，之后的几个月中取出复苏活力均很好。谨将所得体会奉上，供参考。
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【请问带回来的细胞是冻存状态－放在干冰中的，还是常温放在培养液中的?－只是想了解，并不是怀疑和责问】
1. 冻存时机应选择在细胞生长最旺盛时期，比如生长到培养皿80％。
2. DMSO切不可为省钱而买便宜的，最好使用专用于cell culture的，如Sigma的，100ml好像500元人民币。
3. 要冻存前整个细胞室最好严格消毒一次。
4. 冻存的程序是：贴壁细胞消化，离心1000转10min，尽量弃去培养液，一滴一滴加血清，轻轻吹散，加含10％DMSO的培养基，封装冻存管5×10E6 per ml，置于－20C30min，
【从－30C取出时，细胞是否已经变成冷冻状态了】
放在密封的泡沫塑料盒中置-80C冰箱10～15小时，迅速置于液氮可长期保存。
5. 复苏时先准备好38C的水浴，从液氮取出后立即浸入水面，并轻轻摇动，最好在30sec内完全溶开，立即用10ml完全培养基洗涤离心一次以除去DMSO（我倾向于DMSO对某些细胞的复苏后生长有很大影响，因此这样比较保险）
6. 按正常状态种植细胞，血清浓度在首次复苏后的培养是可上调到15％。
