细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】allophycocyanin的荧光颜色

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】allophycocyanin的荧光颜色

hulu呼噜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77048
精华 0
积分 298
帖子 275
信誉分 100
可用分 2196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
1

发表于 2012-10-8 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】allophycocyanin的荧光颜色


现在有些抗体是用allophycocyanin标记的。
我对allophycocyanin不太熟悉，不知道它是发什么颜色的荧光？
先谢了！
顶部
hulu呼噜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77048
精华 0
积分 298
帖子 275
信誉分 100
可用分 2196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
2

发表于 2012-10-8 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 kent 的帖子

在什么地方能查到各个波长范围发射光的颜色？（见笑了，初中物理都给忘了）
顶部
hulu呼噜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77048
精华 0
积分 298
帖子 275
信誉分 100
可用分 2196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
3

发表于 2012-10-8 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kent 于 2012-10-8 15:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
紫色　　(violet)   400-423
蓝色　　(blue) 424-490
绿色　　(green) 491-574
黄色　　(yellow) 575-584
橘黄色　(orange) 585-646
红色　　(red)    647-700

还有一事不明：我在一个公司的网页上看到关于荧光染料的一个表：
简称   吸收波长  发射波长   颜色
6-FAM  494nm   518nm   Green
TET 521nm   538nm   Orange
HEX  535nm   553nm   Pink
TAMRA  560nm   582nm   Rose
ROX  587nm   607nm   Red
Cy3  552nm   570nm   Red
Cy5  643nm   667nm   Violet

若按此表，Cy5的发射波长应处于红光范围内，可为什么表中说是紫色？而我在很多文献中看到的Cy5标记的抗体染色后是呈蓝色（eg. Jiang Y, Jahagirdar BN, Reinhardt RL,et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature. 2002 Jul 4;418(6893):41-9. ）？
真是让人费解。
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
4

发表于 2012-10-8 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我看到这篇文章并下载下来，大家一块讨论一下下！

Colour staining:
Cy3, red;
FITC, green;
Cy5, blue.
Double positive for FITC and Cy3, yellow.


查看积分策略说明
附件
2012-10-8 15:56
92119157.snap.jpg (57.29 KB)
 
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
5

发表于 2012-10-8 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外楼主君不如自己作一次，看看到底会使什么结果。

之后欢迎发表宝贵经验！
顶部
zzzz[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74598
精华 1
积分 656
帖子 967
信誉分 102
可用分 5638
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
6

发表于 2012-10-8 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PE采用488nm激发后发出的波长是585/42波长的波，什么颜色应该是明确的。
顶部
hulu呼噜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77048
精华 0
积分 298
帖子 275
信誉分 100
可用分 2196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
7

发表于 2012-10-8 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那么allophycocyanin呢？（发射波长680 nm）
顶部
DNA[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态 离线
8

发表于 2012-10-8 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

allophycocyanin( APC）的发射光应该是红光，有人称far red，可能因为位于红色光谱的远侧吧。

你用APC标记的抗体，在流式上它的激发光与其它的几种常用荧光是不同的。FITC, PE, Cy-Chrome(or PerCP)的激发光都是氩离子气体激光器发射的488nm激光，而APC的激发光是另外配的一个小功率半导体激光器发射的635nm激光。

看你非常关心它的发射光颜色，应该不是做流式的，是用荧光显微镜观察吧。荧光显微镜的光源是汞灯，发射的是连续波长的光，所以它们激发光要求有差别也无所谓，只是要注意配用合适的滤光片。

关于CY5发射光颜色问题，根据波长应该是红光。midas主任提供的资料竟然也说是兰色，真是糊涂了。你列的那篇文章我暂时拿不到，想知道文章里具体是怎样做的。

如果你实验中用到的是APC，不妨用这种抗体单染阳性对照，看看红色滤光片能否收集到信号。如果用CY5，也可以用同样方法，看哪种滤光片能真正收集到信号，这样就放心了。
顶部