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标题:【求助】原代近端肾小管上皮培养

qhyu[使用道具]
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发表于 2012-10-8 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】原代近端肾小管上皮培养

谁知道从新切下来的肾组织开始原代近端肾小管上皮培养，多谢指教
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-10-8 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
两篇文献参考:
1、英文：《Continuous growth of proximal tubular kidney epithelial cells in hormone-supplemented serum-free medium .L Chuman, LG Fine, AH Cohen, and MH Saier, Jr
J. Cell Biol. 1982 94: 506-510 》

2、《人肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定》
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qhyu[使用道具]
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 小中大

回复 #2 milkdog 的帖子

thank for your help,milkdog.但我需要的是近端肾小管上皮培养的培养方法。
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 小中大

我正在做原代肾小管上皮培养，现在已经有细胞成活，谁不定咱们可以交流交流，我这儿有两篇关于原代近端肾小管上皮培养的文献，是猪和SD大鼠的，请留下email，我可以发送。
希望早日成功！
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发表于 2012-10-8 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谁知道从新切下来的肾组织开始原代近端肾小管上皮培养，多谢指教

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推荐这篇文章希望对你有用！

《用微分离方法培养肾皮质近曲肾小管和髓质集合管上皮细胞及其生物学》
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-10-8 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谁知道从新切下来的肾组织开始原代近端肾小管上皮培养，多谢指教

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早点看到细胞！

《 新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定》
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-10-8 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有亲自做过，手头还有一点SD大鼠近曲小管上皮细胞的培养资料

步骤
1、大鼠乙醚麻醉
2、腹主动脉插管，全身肝素化
3、灌注生理盐水，清洗肾脏2分钟，直至肾脏变白
4、用灌注泵，用V型胶原酶37℃水浴消化15min
5、加入缓冲液，移到10ml离心管
6、通过210um筛网过滤
7、在80un筛网上收集组织
8、将收集物悬浮于KHB缓冲液中
9、清洗和离心800rpm 3min*3
10、利用percoll进行分离
11、组织经离心后分层
12、在显微镜下观察各层组织
13、收集近曲小管层
14、加入10％FCS DMEM 中放置于37℃ CO2孵箱中进行培养

倒置显微镜下观察肾小管纯度达98％以上后，置于37℃ 5％CO2孵箱中，培养一周左右，
即可见原代肾小管上皮细胞
鉴定：
间接免疫荧光染色，肾小管上皮细胞抗细胞角蛋白及抗角蛋白染色阳性
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-10-8 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

thank for your help,我很郁闷的，我找的文章很多都是动物的，而我却是要人的，且我的具体课题也没定 ，但老板说先养起来，所以心情不好。
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-10-8 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
动物的近端肾小管上皮培养文献我也看过一些，但我觉得跟人的会有区别，比如说筛网的孔径等，你说呢？
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发表于 2012-10-8 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
人和动物的原代近端肾小管上皮培养肯定有区别，如上面的“新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定”里面肾小管及肾小球收集的顺序与其他的文献完全相反。不过，我也不知是何故。
不知crystaljob的实验条件怎样，如果不能做到微分离，就只好依据近端肾小管在肾脏里的分布特点摸索摸索，至于用多少目的筛网，可以参考楼上AN69上传的文章。当然，你首先得试一把（材料来源不易，也可考虑先用动物），练练手，你知道，尽量减少操作时间是很重要的。试验过程中怎样减少污染，所用的液体温度、pH值，采取什么方法能使肾小管节段更快的贴壁，还有消化、离心，都要先去体会体会，这些动物和人应该是共同的。
在摸索中共同进步！
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