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标题:【求助】细胞培养

ALALA[使用道具]
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【求助】细胞培养


如果我准备在普通温箱中培养,那么在配制培养液时碳酸氢钠应加多少?另外,培养液的PH值应调至多少?
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toy[使用道具]
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不用CO2孵箱啊?
那不是很麻烦
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toy[使用道具]
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NaCO2的含量一般在培养基的大包装上有注明
pH值一般调在7.2~7.4
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ha111[使用道具]
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看来,这位老弟的确艰苦。不过,说句实话,你的问题除了我能帮你解决外,恐怕在这个院子里没人能帮得了你!(先吹吹): 你知道CO2温箱中的CO2士为了调节培样基的PH值。如果没有CO2, PH值就会升高导致细胞死亡.所以,有两种办法。第一,按照正常配方peizhi配培样基,然后NAHCO3和HCI调节PH值在7.2左右,接种上细胞后,用橡皮塞子把瓶口封死,这样,培样基中德CO2就不会逸出,PH值也就不会升高。但本方法麻烦,培样基要经常调节PH。第二种方法是自制CO2培养箱:找一个干燥器,玻璃的,在下面放入少量5%硫酸铜溶液, 然后在上面的架子上放上只蜡烛,培养瓶的口不用封死,要能交换空气。把接种好细胞的瓶子放入后,点燃蜡烛,盖上干燥器的盖子,注意,在上下盖子之间要沫凡士林。然后把整个干燥器放入普通的 培养箱中。蜡烛一会而就熄灭,此时的CO2浓度大约在5%左右。下一步。。。,就等你出成果了!!
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ffooll[使用道具]
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佩服佩服,不容易,不过有的培养液(或细胞)可以用封闭式培养!
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ALALA[使用道具]
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谢谢各位的指点!我的一位同学说,如果不在CO2孵箱中培养的话,单用碳酸氢钠可能不行;因为其缓冲能力不够强。他建议我换用其它缓冲能力强的试剂。诸位对此有何高见?
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TAT[使用道具]
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用HEPES 缓冲也不错呀.
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loli[使用道具]
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楼上的朋友说得很对。用此缓冲系统就一切搞定。
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summerxx[使用道具]
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碰巧我也是用自制的CO2培养箱,用浓硫酸与20%碳酸钠反应,生成CO2浓度大约在5%左右
下面是我们的培养箱充气方法:
如果一个培养器皿的体积为7.5升,下面装水1.5升,余6升,则需要20%碳酸钠溶液为7.1毫升,反应前加入浓硫酸20毫升,可反应约14次。
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