【求助】GBICOL的DMEM到底加多少碳酸氢钠？

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标题:【求助】GBICOL的DMEM到底加多少碳酸氢钠？

bluelake[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

GBICOL说明书是要求加 3.7g，但是按照以前的经验，加2.1g碳酸氢钠就已经偏碱了，但是有人说，加这么多碳酸氢钠是为了保证里面有足够的离子浓度，不光是调整PH值用，刚才向上海细胞所的人询问，他们是一般加3.7g,然后通co2调整PH值，各位大哥的经验，到底多少合适？？另外DMEM里需要加Hepes吗？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加3.7克是否用co2培养箱平衡？

junhun[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
肿瘤
如果你的细胞对培养环境要求相对较低，如肿瘤细胞株，那么加 3.7g即可；如果你养的是干细胞或做原代培养，那么你的培养基所加碳酸氢钠，取决于CO2浓度，就一般所用5%CO2来讲，可加2.2g或3.7g。具体见
cuturl('http://www.invitrogen.com/content/sfs/protocols/media.pdf')
其他的你还可上cuturl('http://www.invitrogen.com/')

daod[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般加3.7g，HEPES可以不加。

33号[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3.7g ，我们养原代和细胞株都是加这么多的。
我们的DMEM中也一般不加HEPES

33号[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对了，忘了说关键的了，我是用来养293细胞的。293是宁酸勿碱啊，加3.7g又不加hepes ,那岂不是大大的碱了？

remenb[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

任何培养基本身就是一个缓冲系统，无需再加HEPES。培养基在加入3.7g后，PH约为7.3左右（我们实验室测过），在5%CO2培养箱中，其PH值会进一步下降的，再加上细胞代谢产物，培养基会成酸的。
你的293细胞在建株（买来）时，用的是什么培养基？你只要用这种培养条件就好。如果无法确定，那么你可以试一下各种培养条件呀

one[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你们的孵箱CO2浓度有没有校正过？最近我们实验室就出现了这样的情况，老是嫌DMEM里面的NaHCO3的量过高，结果让工程师来测量CO2浓度以后发现浓度只有2%.孵箱在使用过程中每年都应该进行温度和CO2浓度的校正，这样才能维持孵箱的稳定性。

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们的293细胞用的培养基是MEM，是买配置好的液体培养基，这样剩去好多麻烦，也不贵，250ml才40元人民币，其中碳酸氢钠什2.2g。具体你用何种培养基，关键是你得到的293细胞用的是何种培养基？最好还是用原始的培养基。咳！细胞也容易水土不服啊！

glass[使用道具]
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发表于 2012-10-9 17:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们3.7g 不加HEPES

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