【求助】请教关于MTT

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标题:【求助】请教关于MTT

白白的[使用道具]
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发表于 2012-10-10 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位老师：我最近在做MTT，可是出现很多问题，不知道怎么办，也不知道如何处理，请教各位：
1。重复相同的实验，而结果差距很大。
2。实验结果有时侯和预期结果竟然是相反的，而有时侯是一致的。
3。同样一组实验，结果很不稳定，有的值很小，而有的很大。
4。加了MTT后，出现了沉淀，可是吸取上清时，怎样才不丢失？每一孔留下相同的液体会影响实验的结果吗？
有劳各位了！

ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-10-10 16:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

作时,一般作6-8孔,结果差距很大时,去掉一个高的和低的OD值.
实验结果有时侯和预期结果竟然是相反的，而有时侯是一致的,是否为加药或配药不一致?或是不是同一次配的药?
加了MTT后，出现了沉淀，可是吸取上清时，怎样才不丢失?倒过来,用吸水纸吸,不要用力摔打,也可以用负压轻吸出来 .可吸净,再加DMSO.

hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-10-10 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MTT实验结果有波动和很多因素有关：细胞的生长状况、敏感程度；试验者的操作熟练程度；结果计算时样品不同稀释度O.D值的选择范围（一组数据中选择的连续有效O.D值应不低于50%）；每一个样品均应设复孔取均值以减小误差等有关。
关于MTT加入后出现蓝紫色的甲簪结晶可在台式离心机上以2000rpm/min、15min
离心，这样一来结晶可以较紧密结合在96孔板底部，吸净上清后加DMSO溶解于酶标仪进行O.D值测定。
试试看，你一定会有好结果！

白白的[使用道具]
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发表于 2012-10-10 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢二位，我试验试验，然后再汇报结果。
另外 :按照这个速度离心会对细胞有影响吗？书上说的是1000转/分，5分钟的。

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-10-10 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2000rpm/min、15min离心对细胞没有影响，1000转/分，5分钟的离心无法使细胞紧密结合在96孔板底部，吸净上清时很容易带走蓝紫色的甲簪结晶，从而影响结果。

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-10-10 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1建议你不要倒掉培养液上清,改用SDS-DMF 做溶解剂,不用弃上清的,我一直用SDS-DMF,效果很好的,无论怎样,倒掉培养液上清,肯定有细胞损失,实验结果就可能不是预期的结果.
2加样一定要准确,不然加进去细胞数量有差异,结果就不准确.
3加药,MTT等最好是同一批配出来的,因为配制浓度肯定有差异.
4要做空白对照,去掉药物颜色的影响
5多看论坛上MTT的帖子
6看好资料文献,选定最合适自己的

TAT[使用道具]
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发表于 2012-10-10 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MTT法并不是适合所用的实验。如果你用来测在氧化损伤后的细胞活力的改变，建议你最好用LDH法，该法比MTT法稳定。

whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-10-10 17:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议用sds溶解formzan,这样就不用弃上清了。
或者你可以用MTS代替MTT,可以直接检测，

S6044[使用道具]
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