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标题:【求助】大牛血清养K562细胞的要点

c86v[使用道具]
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【求助】大牛血清养K562细胞的要点

我用20%大牛血清养K562细胞状态不好,而且细胞数目很少,我曾试过改为10%的小牛血清,结果出现很多细胞碎片。离心后传代离心后传代细胞还很少,只有几个,请问该如何调整?
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HP007[使用道具]
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k562应该是很好养了。只要按照一般1640配方,在加10%fbs就可以了。
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guagua[使用道具]
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要点:
最重要的是细胞状态一定要好,细胞不好,大牛血清浓度再高也不行,
细胞密度太稀也不行
建议给细胞调状态时用小牛血清,状态好了可以改用小牛血清不过比例要比小牛血清稍高些。
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一叶[使用道具]
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我养过k562细胞,比较好养,前不久还从异地带过一株,回来后状态稍差,但经过调整后缓过来了,养这株细胞的经验就是ph状态很是重要,一般不要太酸了,在7.1以上就可,还有接种浓度也较为重要,一般每ml控制在10的5次方以下,两天换一次液,1640和DMEM均可,但是DMEM中如果没有Hepes的话,一定要注意ph的变化,这将影响细胞的生长,还有这株细胞本身分泌一些颗粒(血红蛋白),所以细胞看起来胞浆有些颗粒,看起来有些发暗,不必紧张,只要膜折光性好,形态规则就没事。
置于血清,我认为不是最重要的,如果调整好状态,血清并不影响它的生长,但是如果目前状态不好,一是加大血清用量,二是换一种血清,待状态好些在换回来也可,三是浓度适宜,最好第二天ph在7。2左右。
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junjie05[使用道具]
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听老板说,K562密度要稍大一点,10的6-7都可以,三天换一次液,各位高手有何见解?
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一叶[使用道具]
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呵呵,如果到了10的7次方,我觉得可能就会有些差错的,因为ph实在是偏低了,但是如果你又hepes就没事了,但是一般控制在10的6就足可以了,如果想速度快些的话,1:2传,每天换一次液,很快就有很多细胞用了。
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c86v[使用道具]
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谢谢各位给予宝贵建议,一般K562细胞的浓度达到多少时可以加药?细胞浓度大了怎样判断是药物起作用还是细胞过密营养不够而导致的细胞数目减少?因为我养细胞时有时发现也有很多细胞碎片
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一叶[使用道具]
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一般来讲,对于96孔板而言,1。如果药物和细胞作用3天的话,据我以前的经验,每孔加4x10的4次方个细胞(这是我们实验室的线性敏感范围,即od值与细胞量的线性关系范围);2。如果是作用5天的话,一般加5x10的4次方个细胞;3。如果你只是几个小时的话,我觉得大概加3~7x10的5次方范围就可以了。

如果是24孔板的话,我觉得大概在此基础上,增大大概4倍左右。
以上仅供参考,要以你实验室的条件在加以调整!祝你成功
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yapuyapu[使用道具]
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我也养K562细胞,我用的是进口小牛血清,国产小牛血清使细胞贴壁很厉害,培养液是浓度为10%的1640培养液,因为配置的时候加入了NaHCO3和Heps,而且培养的时候有CO2调节PH,我认为一般情况下是否养好这种细胞PH不是问题,另外需要指出的是这种细胞比较脆弱,离心过后倒掉旧培养液,加入新的,吹打的时候一定得轻!不可太猛!如果很猛的话,难免会使细胞折腾成碎片!离心的时候转速也不能过大,我用的是300/秒,时间5分钟。祝你成功
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