【求助】皮肤细胞的培养

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标题:【求助】皮肤细胞的培养

eric930[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1 先剪短毛，用含10%硫化钠棉球轻轻涂抹，静置2分钟后，用酒精棉擦，消毒皮肤。
2 将皮肤剪成细长条状，将表皮一侧向下，浸泡在0.25%dispase(用D-Hanks液将储存的1%的dispase稀释)，37℃3小时。
3 用弯头镊将表皮和真皮与结缔组织分离，将分离后的表皮和真皮组织用50ml离心管离心。
4 用0.25%胰酶0.02%EDTA消化2分钟，不停震荡，使消化充分。
5 用D-Hanks洗两遍，用20%工作液培养。六孔板每孔细胞数2-4×10（5）。
6 连续培养近一周，细胞成克隆样生长。

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教，您所说的是不是成年小鼠皮肤细胞的培养？我们曾经做过，但是分离后满视野都是细菌，这个问题您是如何避免的？另外，您所说的20％工作液是不是指20％FBS的培养液？恳请答复。在此先谢过了！

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问如何培养小儿包皮细胞?步骤?

eric930[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教，您所说的是不是成年小鼠皮肤细胞的培养？我们曾经做过，但是分离后满视野都是细菌，这个问题您是如何避免的？另外，您所说的20％工作液是不是指20％FBS的培养液？恳请答复。在此先谢过了！
　My E-mail adress:　xyc_celia@163.com

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是的。不过我们好像没碰到你们的问题。你是怎么消的毒？怎么处理的？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问如何培养小儿包皮细胞?步骤?

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我没做过，不过你可参考：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=226235&sty=3&keywords=%B0%FC%C6%A4')

S6044[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问阁下，您在分离过程中洗涤用的是什么？是生理盐水还是D-Hanks？液体中加不加双抗，剂量是多少？还有，dispase是什么？还请多指教？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是用Dhanks，加100的双抗！

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.将从手术室取下的小儿包皮迅速放在含100单位的双抗DMEM
2.返回细胞室后用D_HANK's清洗2遍
3.用眼科剪和手术刀、弯头镊子等刮去脂肪组织，将表皮和真皮组织剪成1X2cm小狭片，放入20%fbs DMENM,37度，5%co2。
4.剪碎分离后的皮肤组织，用2.5%的胰酶37度热消化20分钟，再过铜网后，接种于培养瓶中；或将皮肤组织、胰酶放在10%fbsDMENM,37度，5%co2过夜。
5，将过夜的组织块过铜网后继培养/。
6.每次接种都要细胞计数：a:胎盘兰B:中性红
7.24小时后换液，传代，防止霉菌污染时可加入两性霉素B
8.表皮细胞和成纤维细胞共培养换表皮细胞培养基后，成纤维细胞逐渐减少。可加入一些EGF
9.可以更具不同细胞的生物学特性通过传代来纯化你的目标细胞。

one[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，成纤维细胞怎么做?真皮组织怎么弃掉了??正是我的困惑之处呢,苦哇!切盼解答!

HP007[使用道具]
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发表于 2012-10-14 10:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 one 于 2012-10-14 10:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主，成纤维细胞怎么做?真皮组织怎么弃掉了??正是我的困惑之处呢,苦哇!切盼解答!

表皮用刀片或剪刀去掉，真皮组织要保留，否则没有成纤维细胞，当然要紧挨着表皮的真皮组织才行。

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