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标题:【求助】淋巴细胞培养

misswu61[使用道具]
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1
 

【求助】淋巴细胞培养


各位高手,我想请教有关淋巴细胞RNA提取中应该注意的问题;
另外,有没有人做过淋巴细胞真核转染。我养的淋巴细胞不太好
资料上说的很好养,但我培养了2个月还是不行。我用了两种方法:
1。淋巴细胞分离液
2。红细胞破碎法
淋巴细胞的量很少?!
转染想选用Hela cell,有高手做过的请停下来看看。
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DDD[使用道具]
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2
 

我现在培养的就是淋巴细胞,小鼠的,脾和外周血的均有。用1640+10%FBS,还可以的。
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tieshazhang[使用道具]
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3
 
你做的是人的还是鼠的?我们做的是人的。可以去血站买白膜,就是分去红细胞后剩下的部分。然后用Ficoll分。取中间的白环。洗2遍后用1640+1FCS养。应该没问题的。
提RNA和一般的没什麽多大的区别。
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66小飞侠[使用道具]
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我也养过淋巴细胞,是人的,B9,很难养。
请问各位,有没有什么好的方法呀?
多谢!
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yes4[使用道具]
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5
 
我养过,是Jurkat细胞,用1640培养液挺好养的。其他的没有养过。
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viviwang1987[使用道具]
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6
 

原代培养的淋巴细胞要加细胞因子,不然的话确实不易养活。
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hot_hot_hot[使用道具]
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7
 
各位高手,我想请教有关淋巴细胞RNA提取中应该注意的问题;
另外,有没有人做过淋巴细胞真核转染。我养的淋巴细胞不太好
资料上说的很好养,但我培养了2个月还是不行。我用了两种方法:
1。淋巴细胞分离液
2。红细胞破碎法
淋巴细胞的量很少?!
转染想选用Hela cell,有高手做过的请停下来看看。

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你好 最近我也要做淋巴细胞培养 是的 书上都是讲非常好培养 我们这里的实验室只有我自己做培养 请问你能否提供你培养的protocal ,以及需要准备的东西?谢谢!另外 所谓的淋巴细胞培养和淋巴细胞增殖反应有什么区别?增殖只要加入PHA 、conA、PWM等就可以了 ,IL-2等一定需要加吗?
我的目的是做初代培养 做药物检测。
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jujuba[使用道具]
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8
 

淋巴细胞不好养,IL-2是一定要的。
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jujuba[使用道具]
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9
 

IL-2是淋巴细胞生长所必需的
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hot_hot_hot[使用道具]
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10
 
如果人外周血细胞用淋巴细胞分离液分离后马上计数加药物做3天的培养,然后RT——PCR,细胞能活3天,并且对药物有足够的反应能力吗?

IL-2和IL-15 有文献显示 对PBMC的CXCR2表达有影响,而我做的就是药物对趋化因子受体表达的影响!
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