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标题:【求助】我的细胞怎么消化不下来

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-10-14 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我的细胞怎么消化不下来


各位高手:我现在进行大鼠的原代骨骼肌细胞培养,养至14天却怎么也不能将它从培养皿上消化下来.我用了各种浓度的胰酶和EDTA组合(注:胰酶没问题,已验证),甚至用2.5%的胰酶在37毒温箱中消化过夜!还是没用.请有这方面经验的人多加指点.
注:我的细胞特点是贴壁加融合与形成微丝连接
不甚感激!!
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-10-14 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是命苦的同志,我和你遇到了完全相同的问题,我培养的骨骼肌细胞也是我用尽胰酶+EDTA也消化不下来.你要是有了办法通知我一下,我的E-mail是:xuzhuojia1980@163.com.大家一起想办法啊!
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发表于 2012-10-14 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用细胞刷轻轻刮试试
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toy[使用道具]
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发表于 2012-10-14 14:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也曾经遇到此问题，你可以将胰酶放在－20度保存，用时才解冻用（先把一些分成小包装5毫升左右），我觉得这样会消化得好些，希望能帮助你！
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zzzz[使用道具]
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发表于 2012-10-14 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！可是我的胰酶是新鲜配制的啊,这样的是不是比冻过的更加厉害啊?
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-10-14 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

新鲜配得最好了，马上分装成小瓶放于－20度，因为在4度久了，胰酶会失效，还是没－20保存好，我们得技术员说的，就是分装比较麻烦，我现在都是用西林瓶5ml那样装起来，觉得还挺有效果的，虽然挺麻烦。不知到这样对你是否有用，还有，你的胰酶里最好有edta。
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发表于 2012-10-14 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1 胰酶4c久放会降低效果
2 EDTA的PH值你有没有测.一般应该在8左右,以前俺的是7,半个小时细胞都没动静.调节了后.一切都顺利多了.
不到完不得已,最好还是不要刮!!
希望对你有帮助!!
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-10-14 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的EDTA的PH值是8.0左右,还是消化不了
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-10-14 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有试过
消化后，把消化液吸干净
用手拍打瓶子？

有时候难消化的时候
我看见带我的老师
就是用力拍打瓶子的
然后可以用手的温度
加热一下瓶子

接着加溶液到瓶子里
反复吹打
细胞就会掉下来的

但是在做这些之前
就是倒掉消化液之前
是看不到
细胞脱落的
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发表于 2012-10-14 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

高浓度胰酶反复吹打
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