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标题:【求助】骨髓来源内皮前体细胞培养

kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-10-14 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】骨髓来源内皮前体细胞培养


请教：有很多文章报道通过诱导贴壁的间充质骨髓干细胞来获取内皮前体细胞，也有很多文章提出hemoangioblast 的概念,认为内皮前体细胞源于此种细胞，而这种细胞应该也是一种造血干细胞，那么这种细胞是否贴壁？如果不贴壁，前边提到的从贴壁细胞培养内皮前体细胞的还是否可行？
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-10-14 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你说的内皮前体细胞是否是内皮祖细胞？
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发表于 2012-10-14 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

angioblast,endothelial progenitor cell是血管干细胞，内皮祖细胞一个概念，hemagioblast是血液血管干细胞，应该说，他们都是不贴壁的，否则就是内皮细胞了，不同来源，体外培养应该都会贴壁，时间不一。其标志有FLK-1，CD34，E-cadherin，AC133等，没有统一定论。
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-10-14 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1 我现在是将骨髓细胞种到培养皿上，然后试图通过对贴壁细胞进行诱导以获取内皮细胞，在24小时后第1次换液，这时会有一些悬浮细胞被丢弃掉，那我就想知道这时的hemagioblast 是不是被丢弃掉了。
2 再就是有文章说贴壁的骨髓间充质细胞内含有比hemagioblast还要原始的细胞，这些细胞在经诱导后可以分化成内皮细胞，并将这种细胞命名为multipotent adult progenitor cell,您对此怎么看？
3 在从骨髓培养内皮细胞时，对于原始细胞的获取主要可以分成两种方法：一，免疫磁珠法提纯cd34细胞 二是通过前面所提到的贴壁间充质细胞，而间充质细胞cd34阴性的。所以我认为这两种方法所培养的细胞并不是一种细胞或者至少是不在同一个分化阶段的细胞，第一种获取的目的细胞可能主要是hemagioblast,而第二种细胞可能是前面所提到的multipotent adult progenitor cell,您看我的理解对吗？
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发表于 2012-10-14 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不知道你现在主要想做哪方面的课题：是从小鼠还是人的骨髓？现在angiblast的标志很多，CD34+，CD34—，FLK-1，AC133，甚至双标记，如FLK-1+/CD34—等，这方面的文献很多。骨髓间充质细胞可能分化潜能更大，不只是内皮细胞，其他象神经，心肌等。如果1d后换液，应该说hemagioblast全丢了。
现在CD34+做的太多了，要想有新意，最好结合其他标志如，FLK-1，CD34—等。
这方面的东西比较多，本人只做Angioblast方面，其他不太了解。
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-10-14 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢one兄能如此及时地回应,我现在是用大鼠的骨髓细胞,试图最终获取具有血管内皮细胞表面标志和功能的细胞.

前面已经提到我培养的starting cell 是骨髓间充质细胞,我们group的好多前辈把我的工作成为"内皮前体细胞的培养",我知道现在好像普遍将cd34阳性/cd14阳性/cd133阳性细胞看作为内皮前体细胞,可是我想既然骨髓间充质细胞不表达cd34,cd14,cd133等细胞标志,那么我做的工作好像不能称为"内皮前体细胞的培养",我觉得"骨髓间充质来源内皮细胞培养"似乎更确切,你对我的这个提法是否赞同,可能钻牛角尖了,见笑.
再次感谢兄台,仍希不吝赐教.
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发表于 2012-10-14 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

骨髓间充质细胞中有EPC吗?
还请指教!
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发表于 2012-10-14 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在正拟作这方面的工作，根据文献资料，应该有的．外周血中的ＥＰＣ来源于骨髓．如骨髓中没有其前体细胞，则其来源应成问题，要么来自某种人们未知的组织．还需探索这种极为少可能的设想.不过内皮祖细胞非常娇贵,需要许多特殊因子,一不小心就可能前功尽弃,各位培养是一定要无菌观念第一位,小心伺候第二位,抓紧时间第三位.步步小心十分必要.
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-10-14 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于人EPC的培养,小妹斗胆请大家留意STEMCELL CO.的ENDOCULT培养基.按其标准步骤理解,EPC来自于骨髓的单核细胞
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-10-14 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

EPC不仅存在于骨髓,而且脐带血\成人外周血中均存在,一般以为外周血EPC来源于骨髓,通过血液循环到缺血缺氧部位后促进局部新生血管形成.EPC白分含量骨髓最多,脐带血次之,成人外周血中数量最少.不过内皮祖细胞的培养需要特殊的培养基,一般应用EGM-2-MV-SINGLEQUIOT的较多,也有应用RMPI1640和M199,不过需要添加VEGF.TGF.ILGF,AFGF.HGF等特殊的生物生长因子.
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