细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】为什么我的细胞固定不好?

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】为什么我的细胞固定不好?

woshituzhu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75774
精华 1
积分 384
帖子 443
信誉分 102
可用分 3001
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态 离线
1

发表于 2012-10-17 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么我的细胞固定不好?


我是用4%的多聚甲醛固定15分钟,最后好多细胞都没有了,我想用APES处理,但不会用,APES需要除菌吗?如何除菌,我的细胞爬片已消毒好了用APES处理后是否要在消毒?请哪位指点一下?谢谢!
顶部
vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
2

发表于 2012-10-17 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是95%酒精固定细胞爬片,还可以.
顶部
TAT[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74236
精华 0
积分 507
帖子 694
信誉分 100
可用分 4298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
3

发表于 2012-10-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一：细胞要处于对数生长期，不能老化。第二:可以用涂了胶的载玻片，载玻片紫外线消毒。
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
4

发表于 2012-10-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般细胞固定30秒-1分钟即可
固定时间太长
预先片子有没有经过多聚赖氨酸的处理？
这个是防止细胞脱落的必须步骤
顶部
dongdongqiang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79825
精华 1
积分 473
帖子 601
信誉分 102
可用分 3821
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
5

发表于 2012-10-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是用4%的多聚甲醛固定15分钟,最后好多细胞都没有了,我想用APES处理,但不会用,APES需要除菌吗?如何除菌,我的细胞爬片已消毒好了用APES处理后是否要在消毒?请哪位指点一下?谢谢!

————————————————————————————————

固定时间太短了，2小时吧
顶部
ladyhuahua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76658
精华 0
积分 984
帖子 1667
信誉分 100
可用分 9116
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-8
状态 离线
6

发表于 2012-10-17 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

固定细胞用甲醇，乙醇或4％多聚甲醛多可以，固定的时间一般1～2分钟可以了，也可以延长到3～4分钟，时间再长就没有必要了。多聚赖氨酸主要用于非贴壁生长的细胞，非贴壁细胞可以用细胞甩片。细胞脱落可能是细胞过多，过老，脱离培养液时间太长，或者操作不慎导致的。尤其是洗脱固定液时导致的，乙醇和甲醇可以不洗，多聚甲醛可以用流水冲洗，但是水流不要太大，水滴刚好成流线即可，不要对着细胞冲洗，因该在载玻片的上端。你再试试吧。
顶部
3648755[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77481
精华 0
积分 574
帖子 767
信誉分 100
可用分 4731
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
7

发表于 2012-10-17 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

固定时间不是关键，细胞的生长状态才是关键，50％的融合就可以。用戊二醛固定不错。最近看了一篇用琼脂糖作细胞包块的文章。你可以试试
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
8

发表于 2012-10-17 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这位仁兄，你是在做免疫细胞化学吧？一般来说，固定细胞用多聚甲醛或甲醇都行，只是甲醛固定时，最好是－20度预冷的，加入甲醇后，放在－20度5－10分钟即可，我同意楼上兄的说法，固定时间不是关键，细胞的生长状态才是关键，不知你培养这些细胞时是否用多聚赖氨酸包被过培养皿，然后再做免疫细胞化学。
顶部
911[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73229
精华 1
积分 523
帖子 682
信誉分 102
可用分 4276
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
9

发表于 2012-10-17 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我固定细胞是用的多聚甲醛，4度过夜！
顶部
xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
10

发表于 2012-10-17 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做细胞培养时,先用多聚赖氨酸包被.固定细胞用多聚甲醛30min,效果可以
顶部
 13  1/2 12››