小中大【求助】组织块法培养成纤维细胞的问题
照鄂征书上的方法培养了6例成人皮肤活检标本，现在只有一例从组织块里爬出fibroblast，再养不成功，我也不好意思取标本了（都是从实验室的人身上取的，养不出来压力特大）自己分析可能的失败原因如下，求各位帮忙看看。先谢谢各位的建议。
1。组织块过小：取下来的组织只有0.2x0.2cm大小，为了设实验组（无血清培养基）与对照组（DMEM+10%FBS)，我又把组织切成两块，分别接种到24孔板中。组织块过小会影响fibroblast游出吗？还是0.1x0.1cm大的组织应该接种到96孔板呢？
2。组织块在未加入培养基时的黏附时间过长：因为组织块小，所以我没有黏附3-4个小时，只黏附了30分钟（这时组织看起来已经很干了）就加入培养基。有人告诉我，黏附时间过长可能影响组织块的活性，应该改为立刻加入培养基（量只要淹没组织的一半即可，以防组织飘起）。可是我看许多文献及之前的帖子都说要黏附，请问黏附是需要的吗？黏附的时间如可决定呢？
另外，何时移除组织块？鄂征书上说是一天后，可是一天后fibroblast还没有游出来，是不是要到游出的fibroblast长70-80%再移走？现在培养出来的一例，fibroblast长的有约0.1x0.2cm大了（在24孔板里），现在就可以传代，还是要等长到孔的70%再传？
