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标题:[未解决]同样是C18柱为什么会发生这种出峰顺序颠倒的现象呢？

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iwfi325iwc[使用道具]
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发表于 2009-7-28 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同样是C18柱为什么会发生这种出峰顺序颠倒的现象呢？

关于液相色谱出峰先后的问题？
做了几年HPLC分析，今天碰到一个问题，两年前在一根C18柱上分离了两个化合物A和B，A先出峰，B后出峰。现在又在相同的条件下分离A和B，唯一不同的是换了另一个厂家的C18柱，现在是B先出峰，A后出峰。请教高手，同样是C18柱为什么会发生这种出峰顺序颠倒的现象呢？
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j-1982[使用道具]
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发表于 2009-7-28 22:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 iwfi325iwc 的帖子

不同的C18柱硅胶的硅胶密度、纯度不一样，键合的C18的密度也不一样，所以导致了分离作用的不同；尽管不存在分离原理不存在质的差别，但由于填料内含物的不同造成的分离作用的微小差异有时就会累积为质的突变。

我们知道，C18是与非极性基团作用的，但未键合上C18的硅胶却仍可能与极性基团作用；正因为C18柱子可能有极性保留，即硅胶表面羟基屏蔽的不好，发生了所谓的“二级反应”，于是对一些化合物极性基团的保留超过了C18的非极性作用，顺序颠倒也就没什么奇怪了。

[ 本帖最后由 j-1982 于 2009-7-28 22:20 编辑 ]
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发表于 2009-7-29 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会不会是原来的柱子有问题，或者现在的柱子有问题，如果原来那柱子还在还能用的话，不妨拿出来进个样试试，或者再换个其他牌子的柱子试试
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发表于 2009-7-29 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
按楼上所说做个试验看看结果如何，不过个人认为只要同一根柱子的结果是一致的就行了，不同柱子之间有差异是正常的。
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发表于 2009-7-29 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好写清楚用的什么柱子，做的什么样品，流动相是什么，柱子以前是否跑过离子对。现在很难判断准确的原因。
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发表于 2009-7-30 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反相色谱峰位重排条件有
1   流动相中换了强溶剂
2   PH值改变
3   柱填料改变
4   柱温改变
5   流动相的组成改变
你 可以对照一下问题在哪。
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发表于 2009-7-30 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
C18柱好多型号，每个厂家生产的不一样，而且你是在两年前的，仪器状态也不一样了，出峰变化很正常
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发表于 2009-7-31 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
C18固定相有多种类型 封端技术不同可能对一些特殊物质的出峰顺序有影响
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发表于 2009-7-31 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
只要不是一个厂家同一个型号的色谱柱就有可能出现这个问题，很正常，填料技术稍有差别。
我还遇到过同是C18柱，一个厂家的完全不出峰，另一个厂家的出峰很好呢。
所以一般固定下来一个牌子一个型号的柱子，没有特殊情况不要随便换。
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发表于 2009-8-1 09:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
C18柱的极性很小啊，如果换了柱子出峰顺序都会改变时=是不太可能的。你仔细检查一下，以前的流动相比例啦，还有柱子的优劣啦，都会影响结果，还有确定一下AB到底对不对。
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