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标题:【求助】 请教脐带内皮细胞培养

baidukk[使用道具]
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【求助】 请教脐带内皮细胞培养


各位,我按照文献及群里介绍的方法怎么得到的内皮细胞这么少?长不起来,
有什么诀窍吗>
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summerxx[使用道具]
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相关疾病:
肿瘤
内皮细胞培养
内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞,对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子(TAF)等有很大价值。
研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便,其法如下:
1、产后新鲜脐带,无菌剪取10—15厘米长一段,如不能立即培养,可于12小时内保存于4℃。
2、用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧,以防液体返流。
3、用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0.1%的粗制胶原酶,充满血管,消化3—10分钟;注入口用线绳扎,以防液体返流。
4、吸出含有内皮细胞的消化液,于离心管中,注入温PBS轻轻反复冲洗后,一并注入离心管中(此步骤可重复)。5、离心去上清,加入RPMI1640培养液制成细胞悬液,接种入培养器皿中,置温箱培养。两至三天可见细胞长成单层
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eric930[使用道具]
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我买的细胞株
两天一传代
长的快呀
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我做的以前也不好长,但把胰酶换成了胶原酶以后就ok了
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xingyi08[使用道具]
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消化时间仍需摸索,我们培养时消化时间为37度15分钟左右,另外培养瓶在用前行胶原或明胶包埋。
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baidukk[使用道具]
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我用的是胶原酶1,消化15分钟,一次性培养瓶,得到的贴壁细胞很少,长不起来,哎
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我用5%的TRYPSIN+0.02%EDTA
消化的还算快
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xueyouzhang[使用道具]
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你不如把你的步骤贴上来大家分析分析,一次性培养瓶的质量怎么样?
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baidukk[使用道具]
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试剂与器材
  ⑴ 胶原酶(Sigma):I型,用无血清低糖DMEM配成0.1%
⑵ 无菌生理盐水             
  ⑶ 止血钳4把、30ml、10ml注射器,无菌手套、粗丝线、饭盒等
  
  操作步骤:
  ⑴
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baidukk[使用道具]
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用0.2%的胶原酶30分钟,得到的细胞多
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