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标题:【求助】MTT有何诀窍？

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-10-22 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】MTT有何诀窍？


我在养肿瘤细胞，准备用MTT初步筛选一下药物对何种肿瘤细胞敏感，但MTT怎么都做不出结果，我甚是苦恼，不知原因出在那里，请各位指教一下可好？
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发表于 2012-10-22 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请你提供具体的方法步骤
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vera+[使用道具]
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发表于 2012-10-22 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先你要在光镜下观察到细胞确有死亡
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发表于 2012-10-22 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
肿瘤
如果你的细胞增殖旺盛，所加入的药物对细胞的影响也许还不足以表现就已经被掩盖掉了。可以采取血清饥饿的办法适当控制肿瘤细胞的生长速度，将药物的作用放大到可检测的程度。注意在实验过程中随时观察细胞的状态，如果有差别，在光镜下是能够区分的，这时就可以加入MTT。多摸索几次，祝你好运。
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-10-22 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢诸位，我倒是经常在光镜下看细胞，刚才还看过，发现药物作用过的细胞生长状态不好，有点像凋亡，不过我把握不准，而且关键是阳性药没什么作用，我在怀疑是不是细胞浓度大了点，可是我是按照10的5次方调的，按常规不应该的。还有昨天我一位同学说MTT必须现用现配，而我用的MTT是去年配的，不过我一直放在-20℃冰箱冻存，我不知问题是否出在这里，我看书上MTT可保存两周在4℃下，究竟MTT该如何用，仍然是众说纷纭，请各位告知可好？
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发表于 2012-10-22 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞数不能太高，尤其生长快的细胞，不然掩盖差别。个人认为经验值估算的细胞数比实际计数要准。MTT可以在－20冻存,浓度配成5mg/ml。
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2012-10-22 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近我也在做MTT，细胞贴壁后我就更换了加药的无血清培养基，加药后24小时的时候细胞形态很好，可是过了一个晚上，细胞基本就没了(对照组也是)，加了MTT以后96孔板底部马上就出现深蓝色的颗粒，很多，不知道是什么原因，细胞的接种浓度从5×10^4到1×10^3都试过，结果都一样。
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youyou99[使用道具]
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发表于 2012-10-22 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有时药物会和MTT有反应，会使测量值增加，在加入MTT前可以将含药物的培养基洗去。
可以选用不同的细胞密度及不同的作用时间作曲线。
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831226[使用道具]
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发表于 2012-10-22 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对于MTT测定细胞凋亡的能力,我始终保持置疑
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-10-22 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
以MTT测定的是细胞的死亡。
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