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标题:【求助】探讨一下,请问MTT可否测定凋亡?

redbutterfly[使用道具]
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【求助】探讨一下,请问MTT可否测定凋亡?

众所周知,MTT是通过能够同活细胞内部的线粒体结合来测定细胞存活率的,而往往凋亡细胞中的细胞器还存在功能,是否这个时候会使MTT的测定结果产生偏差,无法合理的现实的药物的抑制率。
这是我突然想到的,再加上以前曾经碰见过细胞已经完全死亡但染色很深的情况,所以想问问大家,不知大家有没有碰见过。
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tangxin_80[使用道具]
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这个问题也困扰我好久。我一位老师和我说过并不是所有的实验都适合用MTT法测细胞损伤,因为该法本身存在氧化的过程。建议用LDH法测定细胞损伤情况。
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园丁##[使用道具]
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LDH法是什么方法?
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zsxan1990[使用道具]
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相关疾病:
心肌梗死肝炎
MTT实验是对线粒体内膜上琥珀酸脱氢酶活性的检测:

琥珀酸脱氢酶是琥珀酸氧化呼吸链(氧化呼吸链之一)里重要的复合酶之一,它可以催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,从而使FAD接受两个氢原子生成FADH2,然后再将氢传递给CoQ,生成CoQH2,继续呼吸链的电子传递过程。当琥珀酸脱氢酶活性增高时(如细胞增殖等情况),就会催化MTT生成更多的紫红色不溶性的有色产物。---所以凋亡时琥珀酸脱氢酶活性并不一定会降低,所以MTT法不适合去检测细胞凋亡,而坏死或晚期凋亡常常伴有能量合成的障碍,所以琥珀酸脱氢酶活性可能会发生变化。

================================
LDH实验也叫乳酸脱氢酶释放实验,

乳酸脱氢酶是细胞能量代谢(糖酵解)中的一个重要的酶,可以催化乳酸生成丙酮酸,同时产生ATP。如果细胞死亡,胞膜破裂,那么LDH也就从胞浆中释放出来,因此LDH是质膜完整性的标志,也是检测细胞死亡的指标,LDH升得越高就说明细胞损伤得越严重。
这是我们也就不难理解在急性心肌梗塞或肝炎时为什么要检测LDH了吧!
乳酸脱氢酶法(LDH)有专门得试剂盒,应该是检测细胞死亡的一个较好而且方便的指标。
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不可以。MTT只能区分死活细胞,而无测凋亡的特征性。
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redbutterfly[使用道具]
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如果这样来说的话,我利用MTT选选择的高抑制率的药物应该都是没有诱导细胞 凋亡的药物,可以这么说么?
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ending[使用道具]
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不可以。凋亡最后的结果还是细胞死亡,存活细胞数减少或消失,所以MTT会有反映。MTT不能反映的是细胞死亡的原因是凋亡还是坏死。

不过刚看到国内有篇文献说MTT结合形态观察也能测凋亡,但是能否得到公认就不知道了。
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dog002[使用道具]
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请问midas乳酸脱氢酶法(LDH)专门试剂盒哪有卖的谢谢!!
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star#room[使用道具]
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南京建成公司就买 LDH试剂盒,50人份的130元,100人份的250元,我们同学用过,测的效果还不错,你可以联系一下。他的电话号码是:025-3360321/3360969/3112287。E-mail:njjcswgc@sina.com
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dog002[使用道具]
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请问为什么文献检测活细胞时多用MTT很少用LDH?谢谢!!!
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