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标题:【求助】淋巴细胞增殖实验

yjf1026[使用道具]
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发表于 2012-10-23 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】淋巴细胞增殖实验

问题：
分离正常小鼠脾脏淋巴细胞培养
做时间点，分别在0，24，48HOUR加MTT后观察细胞的增殖情况
发现细胞根本就不增殖，OD值是越来越低的
很是头疼
因为正常细胞都培养不好，说明方法是不可靠的
做乐N次实验乐，原因从操作，到培養液，紅細胞裂解液，都找过乐
可是还是无果
一下是偶的照片
是可以用CONA刺激起来的
但是为什么不加CONA时就是不长呢
理论上在48HOUR时OD在2左右的，我的却在0.1左右，接近空白
台盘兰染色发现似乎细胞都死掉乐
狂狂郁闷ING...
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发表于 2012-10-23 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0hour


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发表于 2012-10-23 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

after ConA activiation


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 小中大

control


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发表于 2012-10-23 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Con A的量很重要，每孔1-10 ug,得自已试（每批试剂不同），太多了也不行。我们预试发现1.5 ug最好，10 ug/孔反而不如1.5 ug/孔。不加Con A的不长，是正常的呀！
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发表于 2012-10-23 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问题是不仅不长，而且OD值降低，说明细胞死亡了
淋巴细胞在体外不是可以存活7，8天的么
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发表于 2012-10-23 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是48H的图片，明显的细胞少了
作为正常对照，OD值不该0.1，0.2这么低的呀


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发表于 2012-10-23 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

正常的淋巴细胞不加conA的存活时间是一周，你这种情况不应该，
加conA的量应该是3-5ug/ml,淋巴细胞增值的最好选择是3 H-TdR 参入试验，MTT 不灵敏。加conA使淋巴细胞母化，产生IL-2，从而刺激细胞增值。
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发表于 2012-10-23 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有试过MTS（Promega有试剂盒卖）法测定增值情况？有可能MTT测悬浮细胞不太好！
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toy[使用道具]
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 小中大

另外，我想问一下：小鼠脾脏T细胞比较小，400X下几乎看不到细胞器，有谁有什么好的方法能看到T细胞中的细胞核吗？我想用荧光显微镜照几个凋亡照片！
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