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标题:【求助】逆转录病毒转染PA317 ?

guagua[使用道具]
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【求助】逆转录病毒转染PA317 ?


PLXSN载体转染包装细胞PA317后,何时收病毒上清,一定要测滴度吗,怎么测?
操作时本实验室无生物安全柜,普通超净台可否操作,有何注意事项。
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www.1[使用道具]
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我转染293,36小时,我没有测滴度,我用GFP做对照,至于安全性要考虑你的基因致病性,我们实验室要求所有器皿需经漂白粉消毒。学生多了又有用普通超净台的
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04906[使用道具]
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你做的逆转录病毒,原理上有点担心它可能出现随机整合,导致原癌或抑癌基因活化或失活,有致癌性。逆转录病毒系统的操作说明书上,也写明了要严格的实验条件才能操作。但实际中的操作,自己注意好个人防护,小心操作,我觉得问题不是很大。比如:带手套操作,废液缸高温灭菌后,才能弃废液等等。
不知,你做的是短暂表达还是稳定表达。短暂表达,在转染后2—4天内,可收集细胞上清液,如是稳定表达,筛选出稳定的克隆株后,就可得到稳定的表达病毒的包装细胞,这样病毒就可取之不尽了。
我们拿病毒是用来做其它实验,尤其是做体内实验,测滴度,应该是必须的。
测滴度一般选用NIH3T3细胞,将你的病毒液按梯度稀释后,再用G418(你的是载体质粒是PLXSN)筛选2周,数克隆团。测数举例为:如在稀释10*5,筛出2个克隆细胞团,病毒滴度计为:2×10*5cfu/ml。
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guagua[使用道具]
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你的建议非常有用,谢谢。
今天我刚转染PA317,以后有什么问题还得请教你哦。谢谢
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youyou99[使用道具]
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请问:我用PLXSN载体转染PT67细胞能直接包装出病毒颗粒吗?PLXSN转染PT67,G418筛选,建立稳定的细胞系,收病毒上清进一步转染肿瘤细胞系,却得不到阳性克隆,这是为什么呢?
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我想要几个作逆转录病毒战友的通讯地址,以便电话交流行吗
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lagua123[使用道具]
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你好
我在做逆转录病毒
我的电话 0531 8380273
现在主要做筛选
用电穿孔法转入包装细胞
g418筛选
我也渴望与人交流
我们实验室有生物安全柜 我在使用
不过我认为普通超净台完全可以胜任
下一步应该就是测滴度了
不知结果如何
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kswl870[使用道具]
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8
 
我也在做逆转录病毒,可是滴度太低了
我是从山东出来的^_^
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guagua[使用道具]
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我正在PLXSN转染PA317,刚筛出来,下一步也是测滴度,GOOD LUCK
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bongte[使用道具]
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请问:我用PLXSN载体转染PT67细胞能直接包装出病毒颗粒吗?PLXSN转染PT67,G418筛选,建立稳定的细胞系,收病毒上清进一步转染肿瘤细胞系,却得不到阳性克隆,这是为什么呢?

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您好,我现在准备做逆转录病毒,我有pLPCX载体,可是没有包装细胞,现在急需PT67细胞。看到您那里好像有PT67细胞,希望您能赠送或者能从您那里购买一些。
或者可以和您交换。
期待您的答复。万分感谢!
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