小中大你做的逆转录病毒,原理上有点担心它可能出现随机整合,导致原癌或抑癌基因活化或失活,有致癌性。逆转录病毒系统的操作说明书上,也写明了要严格的实验条件才能操作。但实际中的操作,自己注意好个人防护,小心操作,我觉得问题不是很大。比如:带手套操作,废液缸高温灭菌后,才能弃废液等等。
不知,你做的是短暂表达还是稳定表达。短暂表达,在转染后2—4天内,可收集细胞上清液,如是稳定表达,筛选出稳定的克隆株后,就可得到稳定的表达病毒的包装细胞,这样病毒就可取之不尽了。
我们拿病毒是用来做其它实验,尤其是做体内实验,测滴度,应该是必须的。
测滴度一般选用NIH3T3细胞,将你的病毒液按梯度稀释后,再用G418(你的是载体质粒是PLXSN)筛选2周,数克隆团。测数举例为:如在稀释10*5,筛出2个克隆细胞团,病毒滴度计为:2×10*5cfu/ml。