小中大(三)分离纯化细胞举例
1. 富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2~1.5ml,初步从外周血中分离的PBMC细胞1×108悬于1ml培基中,按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5%与45%Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
2. 纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加50%和30%Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者),按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞;两层Percoll之间为淋巴母细胞,纯度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。
(四) 人不同血细胞的漂浮密度
表 人不同血细胞的漂浮密度
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细 胞 漂浮密度 │ 细 胞 漂浮密度
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红细胞 1.09-1.11 │淋巴细胞 1.052-1.077
粒细胞 │ B淋巴细胞 1.062-1.075
嗜酸性 1.09-1.095 │ T淋巴细胞 1.065-1.077
嗜中性 1.080-1.085 │ 淋巴母细胞 1.065-1.077
单核细胞 1.050-1.066 │自然杀伤细胞 1.050-1.070
血小板 1.030-1.060 │
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