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标题:【求助】HL-60细胞培养的成团现象?

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】HL-60细胞培养的成团现象?

我在培养HL-60细胞时，细胞总是有聚积成团现象，状态好些时成团现象稍好，摇晃培养瓶细胞可散开，但如果聚积成团的时间长，摇晃开后会有很多细胞碎片。我的培养条件是1640培养液，含20％国产胎牛血清。请教该如何解决细胞成团现象？非常感谢！！
另外，我发现HL-60细胞在培养板中培养较培养瓶中状态好，但培养板中细胞容易集中在孔中央。这是什么原因？可以解决吗？
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
白血病肿瘤
HL-60成团是较正常的，说明它还是处在较原始的状态，具有克隆性生长，不必担心，但你说的聚积时间较长时，会有很多细胞碎片，我想是因为要换液了，细胞营养不够了，白血病细胞长得相当快，隔二到三天就要换液了，有时甚至一天就要换一次液。另你提出用的是20%的胎牛血清，我认为在细胞状态好时是不是可以改小一点，我一般都是用的10%的小牛血清，就有很好的效果了。如果细胞长得好时，还用过大牛血清，一样长得很好。
不只是HL-60细胞，像K562一样在培养板里要比用培养瓶中的状态好，可能是因为生长的环境要比在瓶中稳定一些，透气性要好一点，至于你担到的细胞容易集中在孔中间，也是很正常的，和前面提到的克隆性生长有关，另外也和你接种细胞时，细胞自然沉积有关，以及肿瘤细胞生长时需要一定的接触面积才能生长得好。但这些都不会影响细胞的生长状态，所以我觉得没有必要解决。
希望能够解答你的问题！
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也使培养HL-60细胞的。我一直都用10%的小牛血清，生长很好。也不会出现成团现象。
但是上周解冻2月份冻存的细胞后6小时反而出现了这样的成团现象，和qxj1993描述的一样，并且在24小时甚至12小时就开始可见死亡细胞，当然是正常的换液情况下，到了48小时就70%以上死亡。解冻方法绝对没有问题。
不知道这是为什么？
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fox_79[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为一般肿瘤细胞培养用10％小牛血清就足够了，太大，反而不好！
一开始我养细胞时也有成团的，把它消化下来，离心，洗一次，换瓶，接种之前一定要用吸管吹匀！个人意见，仅供参考！
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fox_79[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我原来培养的HL-60细胞成团现象很严重，细胞碎片很多，细胞状态差，现在也是重新复苏的细胞（去年7月份冻存）。
复苏时用的是进口血清培养，细胞很透亮，但有很多形状不规则的细胞（当时考虑可能是冻存对细胞的损伤），细胞有部分成团现象。用进口血清培养了一段时间，细胞状态好转，成团的细胞也少，但仍然有很多形状不规则细胞。改用国产血清后细胞状态每况愈下，成团现象也越来越严重，现在是形状不规则细胞多于圆的细胞。
我基本是根据培养液颜色和细胞增殖的快慢来换液的，因为觉得细胞长的不好，一点都不敢怠慢它。
因为ATCC上介绍HL-60细胞培养条件是20％胎牛血清，所以我也采用比较高浓度的血清培养，希望能把细胞养的好一些。确实也有同学告诉我，用10％小牛血清一样可以把HL-60细胞养的很好。
我现在很困惑，不知道问题究竟出在什么地方，应该怎样来调整。
谢谢各位的指点！
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

养HL-60细胞有将近一年了，一直是用10%的小牛血清。一直都很好的。这点qxj1993不用担心。研究室里一直都是用这个浓度的小牛血清培养这个细胞，有多少年了都不知道了。

不过我这次复苏的细胞也一直都是形状不规则，这已经是两周内的第三次复苏了，因为自己突然有事中断了实验，没有了自己冻存的细胞，现在三次用的都是别人的，最初复苏的2004-2（后来据说冻存前细胞生长状态就不太好，不懂那个人为什么还要冻存，这不是害人吗，那人现已毕业），后来用过2001年的，昨天复苏了99年的，好像都不怎么样。细胞都是冻存在-80度的，时间应该不会有什么问题吧。

唉唉，最近两周一直为这个细胞愁呢。
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发表于 2012-10-25 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞冻在-80度最好在三个月内复苏，不然细胞活力会受影响。
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发表于 2012-10-25 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的也是HL-60细胞，用的是10%小牛血清，长的很好，刚复苏的时候也是成团生长，但细胞长到密度较大时就散开了，不知道是不是和细胞的密度有关系。另外，我现在养的细胞中出现一些黑色的但还有细胞轮廓的死细胞，但细胞的生长并没受影响，不知道是怎么回事？有什么处理的办法吗？
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缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞在刚复苏的时候会不太适应培基环境，可以在第二天换注液的时候做半量换液效果会好一些，此外接种细胞密度不可以太低，细胞之间有细胞因子传递可以促进生长，否则生长很缓慢。我在培养细胞的时候也有时会出现类似死细胞，不影响生长，但背景很让有不快，可以在换液时用无血清培基漂洗一下，不知你那里是否适用，不妨一试。
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-10-25 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

嗯,估计和楼上说的差不多,是细胞密度的原因.
21号复活的细胞终于在昨天看来有好转,期间只继代过一次,复活初细胞的确相对较少,生长十分缓慢.

经众人指点,发现我们研究室细胞培养问题二:
1)除外之外其他人冻存细胞时不对细胞计数,老手倒还好,新手就...所以我复苏的细胞要不就是多得聚集成团死亡要不就是密度过低生长十分缓慢.
2)-80度的状态下保存过久.昨天翻了下,居然都是些99,01,02年的细胞.这次因为去年自己停止实验实属意外所以都是用的别人的冻存细胞.

待这次细胞生长良好后我一定要好好制备自己的冻存细胞并放液氮保存.
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