细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】分离纯化细胞有哪些方法啊？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】分离纯化细胞有哪些方法啊？

JK.jon[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75188
精华 1
积分 528
帖子 652
信誉分 102
可用分 4146
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1

发表于 2012-10-25 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分离纯化细胞有哪些方法啊？

有哪位高手知道若想分离组织里特定的某一种细胞以进一步研究，除了流式细胞仪以外，还有哪些技术可以采用啊？另外，逆流离心的原理是什么？如何用以分离纯化细胞？
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
2

发表于 2012-10-25 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

磁式细胞分选也是一种不错的方法，操作比较简单，纯度也和流式相当，发文章也没有问题。但你要知道这种细胞的特异表面标记并要购买磁珠抗体。
顶部
JK.jon[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75188
精华 1
积分 528
帖子 652
信誉分 102
可用分 4146
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
3

发表于 2012-10-25 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
磁珠法分离细胞大概花费多少？胰岛alpha细胞的特异性表面抗体是什么？另外还有什么方法？
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
4

发表于 2012-10-25 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同的磁珠抗体的价格可能会有所不同，我们用的德国Miltenyi biotec公司的CD34+KIT的价格大约是7千多，但你还要有分离器和柱子。对于表面抗体和流式相同，你做流式用的是荧光标记的表面分子，磁式分离只要用磁珠标记的抗体就好。
如果你不一定要求很高的纯度，也可以先分离出胰岛后用密度梯度分离，国内有这样的文献。
顶部
owanaka[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76900
精华 0
积分 395
帖子 510
信誉分 100
可用分 3337
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
5

发表于 2012-10-25 14:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有如下方法
1.自然纯化法
就是利用某一吃饱的增殖优势，排挤其他细胞生长，去除其他细胞，达到细胞纯化的目的
2. 人工纯化
利用人为手段草曾对某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长，从而达到纯化细胞的目的。包括：
酶消化法
机械划出法反复贴壁法
克隆法流式细胞分离法
磁珠分选法
顶部
kewanqi2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76114
精华 2
积分 534
帖子 660
信誉分 104
可用分 4146
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
6

发表于 2012-10-25 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

拜托，能否告诉我国内的文献是哪一篇？万分感谢！
顶部
了了[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73224
精华 0
积分 367
帖子 453
信誉分 100
可用分 3031
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
7

发表于 2012-10-25 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

曾做过从雏鸡的肾脏取得肾小管上皮细胞，利用细胞不同的密度，用Percoll分离细胞，达到了较好的效果。
顶部
ffooll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73418
精华 0
积分 437
帖子 574
信誉分 100
可用分 3666
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
8

发表于 2012-10-25 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

方法很多。但好的就两个—磁珠分离法和流失细胞术。
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
9

发表于 2012-10-25 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

国内的文献基本都是通过密度分离的，所得细胞的纯度是否能满足你的实验要求就要你自己决定了。
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
10

发表于 2012-10-25 14:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实有两种,实验室条件好的就可选择两种简便的 方法:MACS,FACS;
如果没这种条件,就是人工方法,比如
1.根据不同的培养条件进行筛选,
2.用物理的 方法,密度梯度离心,用percol是一种比较好的选择,
3.根据细胞不同的贴壁能力,选择不同的酶消化时间,或贴壁时间进行筛选,
4.还有就是用细胞刮,机械除去非目的细胞,当然,前提是目的细胞要较密集
我把一篇MACS的综述发出来,希望对你有帮助
顶部
 13  1/2 12››