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标题:【求助】请教转染有关问题

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-10-25 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教转染有关问题


我目前正在摸索脂质体转染的条件，脂质体试剂是lipofectamine,想用它将绿色荧光蛋白转入真核细胞，我试过多种不同的细胞，如293，MCF-7,7721等，但总是不成功，请高手帮忙！
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发表于 2012-10-25 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的情况跟你也差不多。不知道你不成功的表现是什么？我的是转染后细胞大量死亡而且转染效率很低。
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发表于 2012-10-25 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lipofectamine本身对细胞是有损伤的，所以在转染时要求数小时后移除。
我用的是它的换代产品lipofectAMINE2000，感觉还行。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-10-25 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的诸位朋友，我的转染情况也是一样的，存活的细胞很少，且流式检测不到 GFP的表达，我们实验室只有lipofectamine，我现在怀疑细胞本身的转染效率低，不知哪位高手用lipofectamine转染成功，想请教用什么细胞，实验操作的注意事项有哪些，不胜感激！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-10-25 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
尽量少加脂质体，我们实验室用自制的脂质体，也很好用，成本就低很多，制备原料SIGMA有售。
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发表于 2012-10-25 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 rxcc33 于 2012-10-25 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
尽量少加脂质体，我们实验室用自制的脂质体，也很好用，成本就低很多，制备原料SIGMA有售。

能说说你们的详细情况吗
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发表于 2012-10-25 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我刚做过脂质体转染，是ＧＦＰ转真核细胞．我用的也是lipofectamine，转的是ＰＫ－１５细胞，感觉还好的．在荧光显微镜下看还是有很多荧光细胞的．
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发表于 2012-10-25 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教，在做转染的时候有什么特别需要注意的地方吗？选择PK-15除了课题研究的需要外，是否也考虑到转染对细胞类型的要求吗？
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发表于 2012-10-25 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 rxcc33 于 2012-10-25 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
尽量少加脂质体，我们实验室用自制的脂质体，也很好用，成本就低很多，制备原料SIGMA有售。

rxcc群友可否合作。我现在需要用脂质体介导的瘤内注射。用卖的脂质体价格昂贵。我们可以合作吗！谢谢！！
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发表于 2012-10-25 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Hela,BHK都还不错，PK-15也可以。脂质体对细胞有毒性，2.5ul/500ul，不能再多了。你转染不成功，是不是载体有问题，比如移码（希望不是）。对细胞的要求一般应根据载体而定，真核表达的大体机制都相似，如PCDNA，PEGFP-N1 OR C1等载体对细胞无特殊要求，pSFV载体比较特殊，要求转染BHK-21细胞，并且要求电转染，不过我试过脂质体也可以。看这里：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=857374&sty=1')
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